应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求指点 PCR结果分析
51/1返回列表
查看: 885  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

[求助] 求指点 PCR结果分析



cDNA做成之后，加了引物做PCR结果出来了二条带，很奇怪；
怀疑是引物问题： 重新换新的，结果还是一样；
重复一次，结果一样，
难道是cDNA的问题？  各路神仙帮忙指点一下吧。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
一手生存，一手梦想
1楼 2013-04-01 15:01:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunzhengwang

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by bingdong05 at 2013-04-02 15:11:44
引物二聚体很小的，你的目的片段多大？另外像5楼的兄弟说的做个阳性对照，用来验证cdna没有问题；若是怀疑rna有基因组污染，直接用rna作为模版做个pcr看看...

RNA为模版，做PCR这个没做过，请指教
赞一下 回复此楼
一手生存，一手梦想
8楼2013-04-02 16:33:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

bingdong05

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sunzhengwang(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 23:11:34
有目的条带出现即可，pcr出现非特异性条带很正常的，若消除非特异性条带可以适当提高退火温度
赞一下 回复此楼
2楼2013-04-01 15:09:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

牧歌ping

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助，节日愉快 2013-04-01 15:58:38
你扩增的目的基因是否含有内含子？若是有内含子，可能是你逆转前RNA中混杂的DNA没有除尽，所以扩增出现的两条带一条是由DNA为模板扩出，一条是由逆转后的cDNA扩出。若没有内含子，可能是你的引物设计时特异性不高与多个位点结合，或者是退火温度有点低出现了非特异性扩增。
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-01 15:37:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunzhengwang

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bingdong05 at 2013-04-01 15:09:49
有目的条带出现即可，pcr出现非特异性条带很正常的，若消除非特异性条带可以适当提高退火温度

也有可能是引物二聚体啊
赞一下 回复此楼
一手生存，一手梦想
4楼2013-04-02 10:11:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭