24小时热门版块排行榜    

查看: 1017  |  回复: 10

sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

[求助] 求指点 PCR结果分析



cDNA做成之后,加了引物做PCR结果出来了二条带,很奇怪;
怀疑是引物问题: 重新换新的,结果还是一样;
重复一次,结果一样,
难道是cDNA的问题?  各路神仙帮忙指点一下吧。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

一手生存,一手梦想
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bingdong05

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
sunzhengwang(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 23:11:34
有目的条带出现即可,pcr出现非特异性条带很正常的,若消除非特异性条带可以适当提高退火温度
2楼2013-04-01 15:09:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

牧歌ping

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助,节日愉快 2013-04-01 15:58:38
你扩增的目的基因是否含有内含子?若是有内含子,可能是你逆转前RNA中混杂的DNA没有除尽,所以扩增出现的两条带一条是由DNA为模板扩出,一条是由逆转后的cDNA扩出。若没有内含子,可能是你的引物设计时特异性不高与多个位点结合,或者是退火温度有点低出现了非特异性扩增。
3楼2013-04-01 15:37:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bingdong05 at 2013-04-01 15:09:49
有目的条带出现即可,pcr出现非特异性条带很正常的,若消除非特异性条带可以适当提高退火温度

也有可能是引物二聚体啊
一手生存,一手梦想
4楼2013-04-02 10:11:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该用相应的DNA做一个正对照,确定是否cDNA有问题。
5楼2013-04-02 12:14:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
二聚体有可能,但一般分子量很小,容易区分
6楼2013-04-02 12:49:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bingdong05

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
sunzhengwang(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-04-27 20:59:03
引用回帖:
4楼: Originally posted by sunzhengwang at 2013-04-02 10:11:48
也有可能是引物二聚体啊...

引物二聚体很小的,你的目的片段多大?另外像5楼的兄弟说的做个阳性对照,用来验证cdna没有问题;若是怀疑rna有基因组污染,直接用rna作为模版做个pcr看看
7楼2013-04-02 15:11:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by bingdong05 at 2013-04-02 15:11:44
引物二聚体很小的,你的目的片段多大?另外像5楼的兄弟说的做个阳性对照,用来验证cdna没有问题;若是怀疑rna有基因组污染,直接用rna作为模版做个pcr看看...

RNA为模版,做PCR这个没做过,请指教
一手生存,一手梦想
8楼2013-04-02 16:33:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by zhenwuhuang at 2013-04-02 12:49:20
二聚体有可能,但一般分子量很小,容易区分

哦,多谢;
那么提高退火温度,一般提高几度为宜呢,根据你的个人经验?
一手生存,一手梦想
9楼2013-04-02 16:34:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

2度
10楼2013-04-02 16:45:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sunzhengwang 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[公派出国] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 3/150 2026-08-31 22:22 by o3EMxHUAQDtS
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 3/150 2026-08-31 22:14 by o3EMxHUAQDtS
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 3/150 2026-08-31 22:12 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
请填处理意见