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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量溶解曲线怎么回事？
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cnb1987

银虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量溶解曲线怎么回事？

刚跑了荧光定量，有一个基因的溶解曲线的峰在75度，而且峰也不够尖锐，跑胶之后是目的条带。不知道这是什么情况？用的百泰克的荧光定量试剂盒。

溶解曲线图.jpg



跑胶.jpg
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1楼 2013-03-31 09:32:33
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

stt19890101

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
cnb1987(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 20:33:11
gyesang: 回帖置顶 2013-04-27 20:33:21
是不是二聚体在溶解曲线上是可以看出来的  你做实时定量的时候应该有NTC吧 一般你看看你的主峰前面是不是有小的峰就知道了  另外 不是所有的峰溶解温度都是80度以上的  这跟上面我跟你说的因素有关
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6楼2013-03-31 09:58:16
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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cnb1987: 金币+5, ★有帮助 2013-04-01 17:15:59
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 22:47:18
楼主应该做了阴性吧？你可以看下你阴性的溶解曲线图，然后对比一下。。单纯通过这张图不大看得出来，但是根据经验值我觉得应该是引物二聚体的可能性比较大。不过你还是应该和你的阴性对比才能知道。。。
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keepon
10楼2013-04-01 10:12:52
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普通回帖

cnb1987

银虫 (小有名气)
急求啊！
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2楼2013-03-31 09:41:26
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stt19890101

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-03-31 19:30:04
你说的溶解曲线是怎回事？溶解曲线是你的cDNA经过扩增之后，达到一定的量后，溶解的温度，溶解温度与你的目的片段长度和GC含量有关
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3楼2013-03-31 09:46:24
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cnb1987

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by stt19890101 at 2013-03-31 09:46:24
你说的溶解曲线是怎回事？溶解曲线是你的cDNA经过扩增之后，达到一定的量后，溶解的温度，溶解温度与你的目的片段长度和GC含量有关

这个溶解曲线和标准的不一样啊，我现在不确定是引物二聚体还是目的条带。能否从溶解曲线的图，看出我是不是目的条带？目的条带121bp
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4楼2013-03-31 09:49:32
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cnb1987

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by stt19890101 at 2013-03-31 09:46:24
你说的溶解曲线是怎回事？溶解曲线是你的cDNA经过扩增之后，达到一定的量后，溶解的温度，溶解温度与你的目的片段长度和GC含量有关

溶解曲线的峰值一般在80度以上啊
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5楼2013-03-31 09:50:07
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stt19890101

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
cnb1987: 金币+5, ★有帮助 2013-03-31 10:57:40
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 22:47:31
你不是跑胶与marker对照了吗 就是你的目的产物
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7楼2013-03-31 09:59:52
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yangjianchen

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cnb1987(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 20:34:15
溶解曲线看不出目的带多大的，只能看出你的目的带是否单一
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8楼2013-03-31 14:18:52
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cnb1987(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 20:34:02
75°的话感觉是引物二聚体。正常产物熔接峰在80度以上。
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9楼2013-04-01 00:46:28
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