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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 纯化蛋白时关于溶液中咪唑的问题
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yhdchina

新虫 (初入文坛)

[交流] 纯化蛋白时关于溶液中咪唑的问题 已有5人参与

谁知道纯化6*His-tag蛋白，用咪唑洗脱的。咪唑与 6*His-tag竞争与树脂结合，但，蛋白掉下来后，树脂上的咪唑怎么洗脱掉呢？怎样能检测蛋白溶液中含不含咪唑？我纯化的是蛋白药物，后面要做动物实验和结构，用圆二色谱和核磁共振做结构咪唑有没有影响，多大咪唑浓度会有影响？谢谢！
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1楼 2013-03-28 17:55:47
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barenxm

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做动物实验还是把咪唑去掉吧，脱盐或者用超滤置换都可以达到99.9%的置换率。
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2楼2013-03-28 22:02:40
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
柱子洗脱完目的蛋白后应立即用不含咪唑的缓冲液洗。之后，最好用乙醇梯度洗涤。完全再生柱子可以用SDS洗掉金属离子，再重新结合。样品中的咪唑会影响很多后续实验，一般是要除去的。
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3楼2013-03-29 00:08:09
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genda_cto

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1 去除树脂上的咪唑可按照填料的说明书操作。我们一直采用的是，每次使用时，先用EDTA脱镍，再挂镍的操作。
2 蛋白中的咪唑可以从核酸蛋白微量分析仪的扫描光谱中看盐离子的残留量来判定。
3 做药物蛋白，尤其是想以后做人用药，是不允许使用任何标签的，特别是His标签。组氨酸在药典里有严格的规定。
4 蛋白中的咪唑去除可用，透析、脱盐柱、分子层析柱等方法。
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4楼2013-03-29 12:30:59
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yhdchina

新虫 (初入文坛)
★
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖！ 2013-06-09 15:46:19
引用回帖:
2楼: Originally posted by barenxm at 2013-03-28 22:02:40
做动物实验还是把咪唑去掉吧，脱盐或者用超滤置换都可以达到99.9%的置换率。

你好，你说的超滤具体怎么做，是不是用超滤管离心？
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5楼2013-06-09 10:28:27
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by yhdchina at 2013-06-09 10:28:27
你好，你说的超滤具体怎么做，是不是用超滤管离心？...

将试剂装入Millipore超滤离心管里，根据里面有不同孔径的滤膜Millipore超滤离心管有多种规格，拧上盖子，放在离心机转头里，对侧转头加与它质量大致相同的装入水的离心管，然后离心。
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6楼2013-06-09 17:23:28
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yhdchina

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-09 17:23:28
将试剂装入Millipore超滤离心管里，根据里面有不同孔径的滤膜Millipore超滤离心管有多种规格，拧上盖子，放在离心机转头里，对侧转头加与它质量大致相同的装入水的离心管，然后离心。...

超滤应该是提高蛋白浓度的方法吧。
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7楼2013-06-10 10:52:04
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bobe5605

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
超滤有2个作用，1个作用是浓缩，另外1个作用就是置换缓冲液，也就是脱盐
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路漫漫其修远矣，吾将上下而求索！
8楼2013-06-10 16:33:00
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