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yhdchina

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 23
帖子: 28
在线: 12.4小时
虫号: 1320844
注册: 2011-06-11
专业: 生物大分子结构与功能

[交流] 纯化蛋白时关于溶液中咪唑的问题已有5人参与

谁知道纯化6*His-tag蛋白，用咪唑洗脱的。咪唑与 6*His-tag竞争与树脂结合，但，蛋白掉下来后，树脂上的咪唑怎么洗脱掉呢？怎样能检测蛋白溶液中含不含咪唑？我纯化的是蛋白药物，后面要做动物实验和结构，用圆二色谱和核磁共振做结构咪唑有没有影响，多大咪唑浓度会有影响？谢谢！

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1楼2013-03-28 17:55:47

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genda_cto

新虫 (初入文坛)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 23.2
帖子: 16
在线: 4.6小时
虫号: 2232848
注册: 2013-01-10
专业: 生物化学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

1 去除树脂上的咪唑可按照填料的说明书操作。我们一直采用的是，每次使用时，先用EDTA脱镍，再挂镍的操作。
2 蛋白中的咪唑可以从核酸蛋白微量分析仪的扫描光谱中看盐离子的残留量来判定。
3 做药物蛋白，尤其是想以后做人用药，是不允许使用任何标签的，特别是His标签。组氨酸在药典里有严格的规定。
4 蛋白中的咪唑去除可用，透析、脱盐柱、分子层析柱等方法。

赞一下(1人)

4楼2013-03-29 12:30:59

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