| 查看: 2021 | 回复: 3 | |||
[求助]
酿酒酵母的电转方法
|
|
想请教一下酿酒酵母和毕赤酵母电转感受态的制备有什么区别吗？ 我们实验室只有酿酒酵母，可是我只找到了毕赤酵母感受态的制备方式，不知道能不能通用呢？ 一下是毕赤酵母感受态的制备方法： 1)在含 5mlYPD 的 50ml 离心管中，培养毕赤酵母，30 度过夜 2)取 0.1-0.5ml 过夜培养物，接种含 500ml 新鲜培养基的 2L 摇瓶，过夜生长至 OD600＝1.3-1.5 3)4 度，1500g离心 5min收集细胞，用 500ml预冷的灭菌水悬浮细胞 4)如上离心，用 250 ml预冷的灭菌水悬浮细胞 5)如上离心，用 20ml预冷的 1M山梨醇悬浮细胞 6)如上离心，用 1 ml 预冷的1M山梨醇悬浮细胞，至终体积约1.5ml 注意：可冻存80ul 等量的电感受态细胞，但转化效率会下降很多 小女子先谢谢各位大神了！！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 |
» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有209人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
毕赤酵母电转请教
已经有6人回复- 酿酒酵母的ORF与启动子、终止子
已经有10人回复
- 毕赤酵母电转化问题求助
已经有26人回复
- 待电转的酿酒酵母多少OD合适？
已经有5人回复
- 如何在酿酒酵母中进行功能鉴定
已经有5人回复
- 酿酒酵母接种到发酵培养基时的OD值大概应为多少？
已经有7人回复
- 关于毕赤酵母电转化
已经有10人回复
- 求助一个关于酿酒酵母转化的问题
已经有19人回复
- 酿酒酵母 摇瓶问题
已经有10人回复
- 酿酒酵母转化建立突变库
已经有13人回复
- 重组酿酒酵母转化子筛选的问题
已经有12人回复
- 急求酿酒酵母的电转感受态制备方法和转化方法
已经有13人回复
- 亲们~谁做过酿酒酵母的转化，怎么筛选阳性克隆呢？
已经有5人回复
- 20金币 求助关于酿酒酵母的放大培养
已经有9人回复
- 酵母原生质体点转化用多大的电压啊？
已经有3人回复
- 求助毕赤酵母电转化问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母URA3基因敲除的问题
已经有30人回复
- 【求助/交流】酵母表达和原核表达，在技术上有什么不同？
已经有6人回复
- 【求助/交流】管囊酵母和酿酒酵母
已经有9人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母表达载体的构建问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母质粒转化大肠杆菌
已经有11人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母drop-out的配置~~
已经有12人回复
- 【求助/交流】求助酿酒酵母转化
已经有3人回复
- 电转化注意事项
已经有14人回复
greenhope3371
铜虫 (正式写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 1986.5
- 散金: 76
- 红花: 4
- 帖子: 414
- 在线: 150.5小时
- 虫号: 644321
- 注册: 2008-11-03
- 专业: 植物生理与生化
2楼2013-03-26 14:44:26
cory0931
至尊木虫 (文坛精英)
巫山云
- 应助: 28 (小学生)
- 贵宾: 0.101
- 金币: 30224.6
- 散金: 13861
- 红花: 198
- 帖子: 10478
- 在线: 1003.2小时
- 虫号: 1652657
- 注册: 2012-02-29
- 性别: GG
- 专业: 临床兽医学
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
qing1220(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 14:52:31
感谢参与，应助指数 +1
qing1220(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 14:52:31
|
我后期也计划采用毕赤酵母表达，个人觉得值得一试； 另外附上复旦大学一哥们学位论文中的一段描述，粘贴有个别字迹错误，最好自己下载原文参考； 《同源重组技术在酿酒酵母表达载体构建中的应用》 2004年 酵母LiAC转化法[421 接种酿酒酵母单菌落在3mLYEPD培养基中30。C，250rpm振荡培养过夜。 将过夜培养物稀释转接到50mLYEPD培养基中，使得细胞密度为5×106个／n1L。 30。C、250rpm培养5～7hr，使得细胞培养至2×107个／mL(细胞在此期叫繁殖两 代)，5，000rpm、5min离心收集菌体。弃上清，用20mL无菌水悬浮菌体。 5,000rpm、5rain离心收集菌体。弃上清，将菌体悬浮于10mL 0．1M LiAC中， 30。C水浴10rain。5，000rpm、5min离心收集菌体。弃上清，加入1 mL 0．IM LiAC， 混匀，使得细胞终浓度为1×109个／mL(此即为制备好的感受态细胞)。 吸取100I_tL 菌体到一个无菌Eppendorf管中，离心沉淀细胞，用微量移液器吸去LiAC。加 入下列转化混合物：2409L 50％PEG，361aL LiAC，101aL 10rag／mE ssDNA(临用 前应在沸水中煮5分钟，然后立即置于冰上以变性ssDNA)，10此转化DNA(转 化质粒DNA用量为0．5pg、重组转化DNA包括线形化载体片段llxg和目的基因 或目的基因表达单元PCR片段，PCR片段用量为载体片段摩尔比的6倍【261)， 补水至总体积为360pL。30℃水浴30min，42℃水浴20rain。10，000叩m，30s离 心，用微量移液器吸去上清，加100“L无菌水涂布选择性平板。30℃静置培养 2~3天。 |
3楼2013-03-26 14:57:26
4楼2014-03-29 09:23:17