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酿酒酵母的电转方法
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想请教一下酿酒酵母和毕赤酵母电转感受态的制备有什么区别吗? 我们实验室只有酿酒酵母,可是我只找到了毕赤酵母感受态的制备方式,不知道能不能通用呢? 一下是毕赤酵母感受态的制备方法: 1)在含 5mlYPD 的 50ml 离心管中,培养毕赤酵母,30 度过夜 2)取 0.1-0.5ml 过夜培养物,接种含 500ml 新鲜培养基的 2L 摇瓶,过夜生长至 OD600=1.3-1.5 3)4 度,1500g离心 5min收集细胞,用 500ml预冷的灭菌水悬浮细胞 4)如上离心,用 250 ml预冷的灭菌水悬浮细胞 5)如上离心,用 20ml预冷的 1M山梨醇悬浮细胞 6)如上离心,用 1 ml 预冷的1M山梨醇悬浮细胞,至终体积约1.5ml 注意:可冻存80ul 等量的电感受态细胞,但转化效率会下降很多 小女子先谢谢各位大神了!! |
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