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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒酶切拖尾，附图。
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kueradi

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒酶切拖尾，附图。

初学者，目前在把目的基因克隆到pEGFP-C3质粒中,但是，质粒的酶切一直有问题。附上图。酶切之后质粒前面为什么会拖尾。特别是BamHI质粒所在的位置4700bp处量也很少。是酶切过了吗？之前切过4h不理想，换成1h还是这样。
我的双酶切是一起做的，bamHI 0.5ul; HindIII 0.5ul; 1XK buffer 2ul; 质粒10ul;水7ul;
难道是因为bamHI有星活性？
这两个酶可以一起切吗？
请教大牛指教呀呀，实验急急急！！！

酶切.JPG
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1楼 2013-03-23 14:20:29
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kueradi: 金币+1, ★有帮助 2013-03-25 13:22:20
质粒抽提的就不好
重新抽提一下质粒吧，多用几种酶切切看
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2楼2013-03-24 05:55:58
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kueradi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoweiwei121 at 2013-03-24 05:55:58
质粒抽提的就不好
重新抽提一下质粒吧，多用几种酶切切看

嗯我也打算重提质粒，谢谢。
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3楼2013-03-24 10:27:56
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小五来了

金虫 (小有名气)
我也出现过这种情况，不过我的质粒和酶切后的质粒一起跑的时候，都出现了拖尾的情况，原因估计有很多吧，我问过实验室师兄师姐，他们说是DNA降解了，这降解的原因就很多了。所以准备重新再提一次质粒，再酶切一次
赞一下 回复此楼
没有最好，只有更好，珍惜生命，远离读研
4楼2013-04-09 16:29:10
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