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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请大家帮忙看一下单酶切拖尾的问题
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cdmmore

铜虫 (小有名气)

[求助] 请大家帮忙看一下单酶切拖尾的问题

我用HindⅢ和KpnⅠ单酶切质粒，如下图，1是不酶切的空质粒，2是HindⅢ单酶切，3是KpnⅠ单酶切。2号HindⅢ单酶切有拖尾现象，但是3号没有。请大家帮忙分析一下这是什么原因呢？HindⅢ这管酶还能用吗？
谢谢各位啦！

单酶切图.jpg
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1楼 2012-12-30 17:58:40
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songxuebai
2楼2012-12-30 19:31:36
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cdmmore: 金币+2, ★有帮助, 谢谢 2012-12-31 17:07:08
酶的用量没有问题吗？一般HindIII很好用的。此外，你的胶或者电泳条件可能有些问题，所有条带都有些拖。
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3楼2012-12-31 06:38:49
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cdmmore

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-31 06:38:49
酶的用量没有问题吗？一般HindIII很好用的。此外，你的胶或者电泳条件可能有些问题，所有条带都有些拖。

20 ul体系加酶1 ul
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4楼2012-12-31 17:06:38
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by cdmmore at 2012-12-31 17:06:38
20 ul体系加酶1 ul...

20ul体系里面加了多少质粒？酶切了多长时间？
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5楼2013-01-01 03:05:20
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cdmmore

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-01 03:05:20
20ul体系里面加了多少质粒？酶切了多长时间？...

加质粒10 ul（不知道多少ug，就是试剂盒提出来后取10 ul），水7 ul，酶切1 h
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6楼2013-01-02 13:52:57
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
cdmmore: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-01-02 17:19:16
引用回帖:
6楼: Originally posted by cdmmore at 2013-01-02 13:52:57
加质粒10 ul（不知道多少ug，就是试剂盒提出来后取10 ul），水7 ul，酶切1 h...

有些酶对离子强度、pH比较敏感，质粒加体积多了elute buffer可能影响酶切效果。一般提的时候希望质粒浓度比较高，酶切之前最好做个定量。象这样简单的单酶切鉴定一般不需要很多质粒，200ng左右就可以了。
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7楼2013-01-02 14:00:17
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cdmmore

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-02 14:00:17
有些酶对离子强度、pH比较敏感，质粒加体积多了elute buffer可能影响酶切效果。一般提的时候希望质粒浓度比较高，酶切之前最好做个定量。象这样简单的单酶切鉴定一般不需要很多质粒，200ng左右就可以了。...

非常感谢，学习啦
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8楼2013-01-02 17:23:50
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