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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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cdmmore

铜虫 (小有名气)

[求助] 请大家帮忙看一下单酶切拖尾的问题

我用HindⅢ和KpnⅠ单酶切质粒,如下图,1是不酶切的空质粒,2是HindⅢ单酶切,3是KpnⅠ单酶切。2号HindⅢ单酶切有拖尾现象,但是3号没有。请大家帮忙分析一下这是什么原因呢?HindⅢ这管酶还能用吗?
谢谢各位啦!

单酶切图.jpg
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2楼2012-12-30 19:31:36
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
cdmmore: 金币+2, 有帮助, 谢谢 2012-12-31 17:07:08
酶的用量没有问题吗?一般HindIII很好用的。此外,你的胶或者电泳条件可能有些问题,所有条带都有些拖。
3楼2012-12-31 06:38:49
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cdmmore

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-31 06:38:49
酶的用量没有问题吗?一般HindIII很好用的。此外,你的胶或者电泳条件可能有些问题,所有条带都有些拖。

20 ul体系加酶1 ul
4楼2012-12-31 17:06:38
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by cdmmore at 2012-12-31 17:06:38
20 ul体系加酶1 ul...

20ul体系里面加了多少质粒?酶切了多长时间?
5楼2013-01-01 03:05:20
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cdmmore

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-01 03:05:20
20ul体系里面加了多少质粒?酶切了多长时间?...

加质粒10 ul(不知道多少ug,就是试剂盒提出来后取10 ul),水7 ul,酶切1 h
6楼2013-01-02 13:52:57
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
cdmmore: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-01-02 17:19:16
引用回帖:
6楼: Originally posted by cdmmore at 2013-01-02 13:52:57
加质粒10 ul(不知道多少ug,就是试剂盒提出来后取10 ul),水7 ul,酶切1 h...

有些酶对离子强度、pH比较敏感,质粒加体积多了elute buffer可能影响酶切效果。一般提的时候希望质粒浓度比较高,酶切之前最好做个定量。象这样简单的单酶切鉴定一般不需要很多质粒,200ng左右就可以了。
7楼2013-01-02 14:00:17
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cdmmore

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-02 14:00:17
有些酶对离子强度、pH比较敏感,质粒加体积多了elute buffer可能影响酶切效果。一般提的时候希望质粒浓度比较高,酶切之前最好做个定量。象这样简单的单酶切鉴定一般不需要很多质粒,200ng左右就可以了。...

非常感谢,学习啦
8楼2013-01-02 17:23:50
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