24小时热门版块排行榜    

查看: 1689  |  回复: 7

cdmmore

铜虫 (小有名气)

[求助] 请大家帮忙看一下单酶切拖尾的问题

我用HindⅢ和KpnⅠ单酶切质粒,如下图,1是不酶切的空质粒,2是HindⅢ单酶切,3是KpnⅠ单酶切。2号HindⅢ单酶切有拖尾现象,但是3号没有。请大家帮忙分析一下这是什么原因呢?HindⅢ这管酶还能用吗?
谢谢各位啦!

单酶切图.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
2楼2012-12-30 19:31:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
cdmmore: 金币+2, 有帮助, 谢谢 2012-12-31 17:07:08
酶的用量没有问题吗?一般HindIII很好用的。此外,你的胶或者电泳条件可能有些问题,所有条带都有些拖。
3楼2012-12-31 06:38:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdmmore

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-31 06:38:49
酶的用量没有问题吗?一般HindIII很好用的。此外,你的胶或者电泳条件可能有些问题,所有条带都有些拖。

20 ul体系加酶1 ul
4楼2012-12-31 17:06:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by cdmmore at 2012-12-31 17:06:38
20 ul体系加酶1 ul...

20ul体系里面加了多少质粒?酶切了多长时间?
5楼2013-01-01 03:05:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdmmore

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-01 03:05:20
20ul体系里面加了多少质粒?酶切了多长时间?...

加质粒10 ul(不知道多少ug,就是试剂盒提出来后取10 ul),水7 ul,酶切1 h
6楼2013-01-02 13:52:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
cdmmore: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-01-02 17:19:16
引用回帖:
6楼: Originally posted by cdmmore at 2013-01-02 13:52:57
加质粒10 ul(不知道多少ug,就是试剂盒提出来后取10 ul),水7 ul,酶切1 h...

有些酶对离子强度、pH比较敏感,质粒加体积多了elute buffer可能影响酶切效果。一般提的时候希望质粒浓度比较高,酶切之前最好做个定量。象这样简单的单酶切鉴定一般不需要很多质粒,200ng左右就可以了。
7楼2013-01-02 14:00:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdmmore

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-02 14:00:17
有些酶对离子强度、pH比较敏感,质粒加体积多了elute buffer可能影响酶切效果。一般提的时候希望质粒浓度比较高,酶切之前最好做个定量。象这样简单的单酶切鉴定一般不需要很多质粒,200ng左右就可以了。...

非常感谢,学习啦
8楼2013-01-02 17:23:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cdmmore 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程321分求调剂 +7 大米饭! 2026-03-15 7/350 2026-03-16 10:25 by 了了了了。。
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历,论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 289求调剂 +5 步川酷紫123 2026-03-11 5/250 2026-03-15 00:45 by kruisytel
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy! 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕288分求调剂 一志愿211 +4 在家想你 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:49 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 +4 快乐的香蕉 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:41 by JourneyLucky
[考研] 求调剂(材料与化工327) +4 爱吃香菜啦 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:11 by JourneyLucky
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 【考研调剂求收留】 +3 Ceciilia 2026-03-11 3/150 2026-03-13 20:18 by JourneyLucky
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 341求调剂 +4 捣蛋猪猪 2026-03-11 4/200 2026-03-12 14:47 by ruiyingmiao
[考研] 420求调剂 +4 莫向外求11 2026-03-10 6/300 2026-03-12 14:41 by ruiyingmiao
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
[考研] 数二英二309分请求调剂 +3 dtdxzxx 2026-03-09 4/200 2026-03-09 19:56 by yuningshan
信息提示
请填处理意见