应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pET28a载体蛋白表达为包涵体
51/1返回列表
查看: 2907  |  回复: 5
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wxl.1989822

金虫 (小有名气)

[求助] pET28a载体蛋白表达为包涵体

RT
本人最近在做利用pET28a载体表达纯化蛋白，菌是BL21，最近连续两次跑胶都是破碎后沉淀有目的条带，上清非常淡条带。具体实验步骤也就是：诱导后菌体4度离心后破碎，不过破碎后我采用的是常温离心10分钟左右，会不会是因为这样引起的蛋白被沉淀了？注：诱导采用的是终浓度0.2 0.4 0.6 0.8 1.0的梯度。诱导温度25和37结果差不多。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

质粒构建

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2013-03-13 08:52:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

韩叽哩咕噜

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by searchman at 2013-03-18 01:51:43
试试ArcticExpress Competent Cells，我用的载体和你一样，蛋白可溶性很好。
http://www.chem-agilent.com/pdf/strata/230191.pdf

请问  是哪家的感受态呀？
赞一下 回复此楼
6楼2018-10-31 16:25:58
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wxl.1989822: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-03-13 10:38:09
可以试试IPTG浓度低一点，诱导温度16度过夜。此外，破碎后要低温离心，为什么要常温离心？常温离心也不一定会造成蛋白沉淀，但是如果蛋白不稳定的话，会有降解等风险。如果实在不可溶的话，要么尝试包涵体复性，要么换载体和宿主菌。可以采用BL21 TrxB菌，同时载体可以换成带GST标签或Trx标签等有促溶作用的。
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-13 09:42:16
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxl.1989822

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-03-13 09:42:16
可以试试IPTG浓度低一点，诱导温度16度过夜。此外，破碎后要低温离心，为什么要常温离心？常温离心也不一定会造成蛋白沉淀，但是如果蛋白不稳定的话，会有降解等风险。如果实在不可溶的话，要么尝试包涵体复性，要么 ...

请问你用过BL21 TrxB菌吗？另外我们组其他人用的pET28a和BL21（DE3）的也没有出现过包涵体，我昨天又用16过夜诱导了，还是上清没有目的蛋白，而且沉淀里的量比37度的好像还低了点。
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-16 11:30:59
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

searchman

新虫 (初入文坛)
试试ArcticExpress Competent Cells，我用的载体和你一样，蛋白可溶性很好。
http://www.chem-agilent.com/pdf/strata/230191.pdf
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-03-18 01:51:43
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭