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wxl.1989822

金虫 (小有名气)

应助: 13 (小学生)
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红花: 15
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在线: 63.9小时
虫号: 2103782
注册: 2012-11-03
性别: GG
专业: 免疫生物学

[求助] pET28a载体蛋白表达为包涵体

RT
本人最近在做利用pET28a载体表达纯化蛋白，菌是BL21，最近连续两次跑胶都是破碎后沉淀有目的条带，上清非常淡条带。具体实验步骤也就是：诱导后菌体4度离心后破碎，不过破碎后我采用的是常温离心10分钟左右，会不会是因为这样引起的蛋白被沉淀了？注：诱导采用的是终浓度0.2 0.4 0.6 0.8 1.0的梯度。诱导温度25和37结果差不多。

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1楼 2013-03-13 08:52:20

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searchman

新虫 (初入文坛)

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在线: 9.7小时
虫号: 159683
注册: 2006-01-07
性别: MM
专业: 植物生理与生化

试试ArcticExpress Competent Cells，我用的载体和你一样，蛋白可溶性很好。
http://www.chem-agilent.com/pdf/strata/230191.pdf

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4楼2013-03-18 01:51:43

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