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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pET-30a(+)不表达
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田甜思

新虫 (初入文坛)

[求助] pET-30a(+)不表达

一直在做pET-30a(+)这个载体，但是不表达，我是在37度下培养的，都是在OD600=0.6-0.7之间加IPTG的，但就是不表达，质粒测序是正确的。各位帮忙解决下。谢谢！
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1楼2013-03-12 20:40:31
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分子菜鸟

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一、看看有没有提前终止的地方。
二、看看重组的载体有没有移码的地方。
三、如果都没有。改变诱导条件，加大IPTG的浓度，瓶子中少放培养基并且加大转速。
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9楼2013-03-14 10:52:29
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你检测的是全菌蛋白吗？有跑胶的图片吗？
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2楼2013-03-13 00:38:15
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jian520yi

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白不表达和蛋白本身的性质，蛋白来源物种有很多关系。
不表达是很正常的。
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成功源自于不断的努力和坚持
3楼2013-03-13 08:37:29
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wxl.1989822

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
诱导时采用几个IPTG浓度梯度，不同浓度的IPTG下对表达量有重要影响。
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4楼2013-03-13 10:51:00
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