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田甜思

新虫 (初入文坛)

[求助] pET-30a(+)不表达

一直在做pET-30a(+)这个载体,但是不表达,我是在37度下培养的,都是在OD600=0.6-0.7之间加IPTG的,但就是不表达,质粒测序是正确的。各位帮忙解决下。谢谢!
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wxl.1989822

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
诱导时采用几个IPTG浓度梯度,不同浓度的IPTG下对表达量有重要影响。
4楼2013-03-13 10:51:00
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你检测的是全菌蛋白吗?有跑胶的图片吗?
2楼2013-03-13 00:38:15
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jian520yi

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
蛋白不表达和蛋白本身的性质,蛋白来源物种有很多关系。
不表达是很正常的。
成功源自于不断的努力和坚持
3楼2013-03-13 08:37:29
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robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-13 20:29:17
以下几点仅供参考:
1,有没有加翻译起始密码子,
2,是不是要表达的蛋白很大,很大的话,不易表达,
3,你怎么知道你得蛋白没表达,你用的事什么标签检测的,有时候光凭借IPTG诱导前后蛋白表达量的变化作为鉴定指标并不是很可靠。
4,建议可以在你的蛋白前面加个GST标签引导表达,虽然没有什么依据,对于某些蛋白可以起到增加表达的作用。
5,就像我以前解答另一个求助的一样,蛋白不表达时,也有可能是稀有密码子导致的。
immunologyparasite
5楼2013-03-13 11:19:32
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