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田甜思

新虫 (初入文坛)

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[求助] pET-30a(+)不表达

一直在做pET-30a(+)这个载体，但是不表达，我是在37度下培养的，都是在OD600=0.6-0.7之间加IPTG的，但就是不表达，质粒测序是正确的。各位帮忙解决下。谢谢！

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1楼2013-03-12 20:40:31

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robustli

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-13 20:29:17

以下几点仅供参考：
1，有没有加翻译起始密码子，
2，是不是要表达的蛋白很大，很大的话，不易表达，
3，你怎么知道你得蛋白没表达，你用的事什么标签检测的，有时候光凭借IPTG诱导前后蛋白表达量的变化作为鉴定指标并不是很可靠。
4，建议可以在你的蛋白前面加个GST标签引导表达，虽然没有什么依据，对于某些蛋白可以起到增加表达的作用。
5，就像我以前解答另一个求助的一样，蛋白不表达时，也有可能是稀有密码子导致的。