24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3544  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

田甜思

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] pET-30a(+)不表达

一直在做pET-30a(+)这个载体,但是不表达,我是在37度下培养的,都是在OD600=0.6-0.7之间加IPTG的,但就是不表达,质粒测序是正确的。各位帮忙解决下。谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robustli

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-13 20:29:17
以下几点仅供参考:
1,有没有加翻译起始密码子,
2,是不是要表达的蛋白很大,很大的话,不易表达,
3,你怎么知道你得蛋白没表达,你用的事什么标签检测的,有时候光凭借IPTG诱导前后蛋白表达量的变化作为鉴定指标并不是很可靠。
4,建议可以在你的蛋白前面加个GST标签引导表达,虽然没有什么依据,对于某些蛋白可以起到增加表达的作用。
5,就像我以前解答另一个求助的一样,蛋白不表达时,也有可能是稀有密码子导致的。
immunologyparasite
5楼2013-03-13 11:19:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

cicelyzh

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你检测的是全菌蛋白吗?有跑胶的图片吗?
2楼2013-03-13 00:38:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jian520yi

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
蛋白不表达和蛋白本身的性质,蛋白来源物种有很多关系。
不表达是很正常的。
成功源自于不断的努力和坚持
3楼2013-03-13 08:37:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxl.1989822

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
诱导时采用几个IPTG浓度梯度,不同浓度的IPTG下对表达量有重要影响。
4楼2013-03-13 10:51:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600 一志愿9 总分351 求调剂学校 +7 czhcz 2026-03-31 7/350 2026-03-31 18:54 by 小张做实验
[考研] 材料调剂 +9 Eujd1 2026-03-31 10/500 2026-03-31 18:41 by JourneyLucky
[考研] 254材料与化工求调剂 +3 翰冬林楠 2026-03-30 4/200 2026-03-31 17:53 by yishunmin
[考研] 求调剂 生物学 377分 +6 zzll03 2026-03-31 6/300 2026-03-31 17:33 by 唐沐儿
[考研] 262求调剂 +7 ZZ..000 2026-03-30 8/400 2026-03-31 10:05 by cal0306
[考研] 274求调剂 +6 xiao爱同学 2026-03-30 6/300 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 抱歉 +4 田洪有 2026-03-30 4/200 2026-03-30 21:26 by mumin1990
[考研] 105500药学求调剂,一志愿山东大学药学,348分 +3 gr哈哈哈 2026-03-28 3/150 2026-03-30 18:56 by 源_2020
[考研] 材料化工340求调剂 +3 jhx777 2026-03-30 3/150 2026-03-30 17:54 by JourneyLucky
[考研] 328求调剂 +8 嗯滴的基本都 2026-03-27 8/400 2026-03-30 17:20 by Wang200018
[考研] 337求调剂 +6 《树》 2026-03-29 6/300 2026-03-30 10:15 by herarysara
[考研] 本科新能源科学与工程,一志愿华理能动285求调剂 +7 AZMK 2026-03-28 11/550 2026-03-28 21:01 by xxxsssccc
[考研] 071000生物学求调剂,初试成绩343 +7 小小甜面团 2026-03-25 7/350 2026-03-28 20:25 by 唐沐儿
[考研] 339求调剂,想调回江苏 +6 烤麦芽 2026-03-27 8/400 2026-03-28 10:40 by 烤麦芽
[考研] 315分求调剂 +7 26考研上岸版26 2026-03-26 7/350 2026-03-28 04:05 by fmesaito
[考研] 298调剂 +3 jiyingjie123 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:57 by wxiongid
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:57 by nihaoar
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
信息提示
请填处理意见