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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pET-30a(+)不表达
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田甜思

新虫 (初入文坛)

[求助] pET-30a(+)不表达

一直在做pET-30a(+)这个载体，但是不表达，我是在37度下培养的，都是在OD600=0.6-0.7之间加IPTG的，但就是不表达，质粒测序是正确的。各位帮忙解决下。谢谢！
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1楼 2013-03-12 20:40:31
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jian520yi

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白不表达和蛋白本身的性质，蛋白来源物种有很多关系。
不表达是很正常的。
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成功源自于不断的努力和坚持
3楼2013-03-13 08:37:29
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你检测的是全菌蛋白吗？有跑胶的图片吗？
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2楼2013-03-13 00:38:15
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wxl.1989822

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
诱导时采用几个IPTG浓度梯度，不同浓度的IPTG下对表达量有重要影响。
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4楼2013-03-13 10:51:00
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robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-13 20:29:17
以下几点仅供参考：
1，有没有加翻译起始密码子，
2，是不是要表达的蛋白很大，很大的话，不易表达，
3，你怎么知道你得蛋白没表达，你用的事什么标签检测的，有时候光凭借IPTG诱导前后蛋白表达量的变化作为鉴定指标并不是很可靠。
4，建议可以在你的蛋白前面加个GST标签引导表达，虽然没有什么依据，对于某些蛋白可以起到增加表达的作用。
5，就像我以前解答另一个求助的一样，蛋白不表达时，也有可能是稀有密码子导致的。
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immunologyparasite
5楼2013-03-13 11:19:32
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