24小时热门版块排行榜    

查看: 3499  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

田甜思

新虫 (初入文坛)

[求助] pET-30a(+)不表达

一直在做pET-30a(+)这个载体,但是不表达,我是在37度下培养的,都是在OD600=0.6-0.7之间加IPTG的,但就是不表达,质粒测序是正确的。各位帮忙解决下。谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jian520yi

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
蛋白不表达和蛋白本身的性质,蛋白来源物种有很多关系。
不表达是很正常的。
成功源自于不断的努力和坚持
3楼2013-03-13 08:37:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你检测的是全菌蛋白吗?有跑胶的图片吗?
2楼2013-03-13 00:38:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxl.1989822

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
诱导时采用几个IPTG浓度梯度,不同浓度的IPTG下对表达量有重要影响。
4楼2013-03-13 10:51:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-13 20:29:17
以下几点仅供参考:
1,有没有加翻译起始密码子,
2,是不是要表达的蛋白很大,很大的话,不易表达,
3,你怎么知道你得蛋白没表达,你用的事什么标签检测的,有时候光凭借IPTG诱导前后蛋白表达量的变化作为鉴定指标并不是很可靠。
4,建议可以在你的蛋白前面加个GST标签引导表达,虽然没有什么依据,对于某些蛋白可以起到增加表达的作用。
5,就像我以前解答另一个求助的一样,蛋白不表达时,也有可能是稀有密码子导致的。
immunologyparasite
5楼2013-03-13 11:19:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 301求调剂 +6 yy要上岸呀 2026-03-17 6/300 2026-03-17 23:58 by 星空星月
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-16 8/400 2026-03-17 19:03 by Wangjingyue
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +16 不知道叫什么! 2026-03-15 18/900 2026-03-17 17:05 by ruiyingmiao
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +4 梨花珞晚风 2026-03-17 4/200 2026-03-17 13:38 by houyaoxu
[硕博家园] 深圳大学硕士招生(2026秋,传感器方向,仅录取第一志愿) +4 xujiaoszu 2026-03-11 9/450 2026-03-17 10:29 by xujiaoszu
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨; 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 机械专硕325,寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 求调剂(材料与化工327) +4 爱吃香菜啦 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:11 by JourneyLucky
[考研] 工科,求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 301求调剂 +6 Liyouyumairs 2026-03-11 6/300 2026-03-13 20:11 by JourneyLucky
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 321求调剂(食品/专硕) +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
信息提示
请填处理意见