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田甜思

新虫 (初入文坛)

[求助] pET-30a(+)不表达

一直在做pET-30a(+)这个载体,但是不表达,我是在37度下培养的,都是在OD600=0.6-0.7之间加IPTG的,但就是不表达,质粒测序是正确的。各位帮忙解决下。谢谢!
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田甜思

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by robustli at 2013-03-13 11:19:32
以下几点仅供参考:
1,有没有加翻译起始密码子,
2,是不是要表达的蛋白很大,很大的话,不易表达,
3,你怎么知道你得蛋白没表达,你用的事什么标签检测的,有时候光凭借IPTG诱导前后蛋白表达量的变化作为鉴定 ...

本身的载体就带有His-tag的呀,我的目的蛋白不含稀有密码子的,上述原因我应该都不存在,但就是表达不出来
8楼2013-03-13 16:44:49
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查看全部 17 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你检测的是全菌蛋白吗?有跑胶的图片吗?
2楼2013-03-13 00:38:15
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jian520yi

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
蛋白不表达和蛋白本身的性质,蛋白来源物种有很多关系。
不表达是很正常的。
成功源自于不断的努力和坚持
3楼2013-03-13 08:37:29
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wxl.1989822

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
诱导时采用几个IPTG浓度梯度,不同浓度的IPTG下对表达量有重要影响。
4楼2013-03-13 10:51:00
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