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liqingabcd

铜虫 (小有名气)


[交流] 如何浓缩PCR产物?

求助大家,如何对PCR产物进行浓缩?还有大家知道对DNA定量的比较好的方法吗?研一新手,谢谢!
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wiln1

金虫 (小有名气)



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跑电泳切胶回收、有专门的核酸定量仪器
2楼2013-03-12 19:59:55
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phhcrab

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看你要怎么浓缩了,如果要把几份产物浓缩成一份的话,可以试试乙醇浓缩沉淀。
定量也是看你要哪个程度的了,总的DNA定量的话,就核酸蛋白测定仪,其实也就是分光光度计,检测OD260。要对某个基因定量,可以做荧光定量PCR。
3楼2013-03-12 20:17:07
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小渣蛋

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
好像除了PCR产物回收KIT外没啥好方法!PCR片段比较小,用酒精或者异丙醇不易沉淀浓缩啊!
4楼2013-03-12 21:13:34
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sxxuan

金虫 (著名写手)


★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-03-13 19:48:57
楼上也有虫友说到,一般就用无水乙醇或PCR纯化试剂盒浓缩。与楼上相反,片段小的PCR产物我会用2.5V的无水乙醇和1/10V的醋酸钠去沉淀,损失在所难免,胜在溶解的时候可以自己控制加多少水或者TE,相对也就达到了浓缩的效果。
而用kit,就像是纯化一样,把多管PCR产物都集中在一个纯化柱,也就是相对地浓缩了,洗脱的时候最好分成两步去洗脱,或者洗脱一次后重复加到纯化柱再洗脱一次,效果会好一点。
检测浓度的话,我们实验室有紫外风光光度计测OD260,也有专门的核酸检测仪直接读数的。其实两者的原理是一样的。再有的话就是3楼说的荧光定量PCR,如果本身没有引物探针的话就用吸光值确定算了,合成探针也不便宜。
5楼2013-03-13 09:02:00
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wxl.1989822

金虫 (小有名气)



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有专门的试剂盒的 TAKARA的
6楼2013-03-13 10:44:09
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yujitianqing

铁虫 (正式写手)



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核算定量可用紫外分光光度计粗略测定,因为PCR结束后体系里还是会有dNTP,影响吸光值,所以只能通过这种方法得知其大概浓度……
7楼2013-03-13 11:29:51
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qqxs

木虫 (正式写手)



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用PCR产物纯化试剂盒回收,洗脱的时候稍加水就等于浓缩了。纯化后的PCR产物直接测定OD260定量即可
8楼2013-03-13 12:39:14
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