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liqingabcd

铜虫 (小有名气)

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[交流] 如何浓缩PCR产物？

求助大家，如何对PCR产物进行浓缩？还有大家知道对DNA定量的比较好的方法吗？研一新手，谢谢！

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1楼 2013-03-12 19:55:37

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sxxuan

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-03-13 19:48:57

楼上也有虫友说到，一般就用无水乙醇或PCR纯化试剂盒浓缩。与楼上相反，片段小的PCR产物我会用2.5V的无水乙醇和1/10V的醋酸钠去沉淀，损失在所难免，胜在溶解的时候可以自己控制加多少水或者TE，相对也就达到了浓缩的效果。
而用kit，就像是纯化一样，把多管PCR产物都集中在一个纯化柱，也就是相对地浓缩了，洗脱的时候最好分成两步去洗脱，或者洗脱一次后重复加到纯化柱再洗脱一次，效果会好一点。
检测浓度的话，我们实验室有紫外风光光度计测OD260，也有专门的核酸检测仪直接读数的。其实两者的原理是一样的。再有的话就是3楼说的荧光定量PCR，如果本身没有引物探针的话就用吸光值确定算了，合成探针也不便宜。