| 查看: 1796 | 回复: 4 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
mahoumeimei金虫 (小有名气)
|
[求助]
荧光定量PCR-绝对定量
|
|
|
最近想通过定量PCR来分析不同时期体系中目标微生物的含量变化，主要是针对DNA做绝对定量。但看了一些资料后，有一点疑问。 做绝对定量事先不是需要制备质粒标准品来做标准曲线吗。资料上是说，通过克隆制备，提取出来的质粒DNA通过分光光度计测定浓度，再根据质量信息换算成目标基因含量，再稀释做标准曲线，得到目标基因含量和Ct值的关系。 可是我不明白，既然通过测定样品浓度就可以计算出目标基因的含量，为什么还要多此一举，做定量PCR呢？或者说，定量PCR的意义不仅仅是这样，但如果我的目的就是得到目的基因含量的话，其实是不需要做定量PCR的？ 新手学习中，希望大家给点建议。非常感谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有143人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 荧光定量PCR扩增效率低
已经有16人回复
- 荧光定量PCR结果如何处理
已经有12人回复
- 关于荧光定量的问题
已经有8人回复
- 荧光定量pcr溶解曲线好几个峰，但是电泳只有一条目的条带，怎么回事
已经有5人回复
- 有做过荧光定量PCR的吗？
已经有9人回复
- 荧光定量PCR实验技术
已经有15人回复
- 荧光定量PCR。。。求助求助
已经有17人回复
- 如何测定样品中活体微生物数量？
已经有17人回复
- 荧光定量PCR标准曲线的建立
已经有3人回复
- 荧光定量PCR扩增效率怎么做？？？？我要被逼疯了
已经有17人回复
- 荧光定量PCR cDNA怎么定量啊？
已经有12人回复
- 相对定量PCR求助
已经有16人回复
- 荧光定量PCR与普通PCR产物不一样？
已经有6人回复
- 标准菌株建立荧光定量PCR的标准曲线
已经有5人回复
- 【求助】我这叫什么PCR呢？
已经有5人回复
- 【求助/交流】克隆-定量-测序，结果怪异
已经有8人回复
- 【求助/交流】如何测定某一蛋白在不同组织的表达量？
已经有4人回复
- 【求助/交流】关于做荧光定量pcr的模板问题
已经有12人回复
- 【分享】荧光定量PCR实验指南（二）
已经有12人回复
- 【求助/交流】荧光定量pcr
已经有11人回复
3楼2013-03-26 11:04:39
chenguestc
木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 576 (博士)
- 贵宾: 0.4
- 金币: 4526.9
- 散金: 1639
- 红花: 176
- 帖子: 4708
- 在线: 353.5小时
- 虫号: 1337860
- 注册: 2011-07-05
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mahoumeimei: 金币+2, 自己已经想明白了，不过还是谢谢你的回复: ) 2013-03-07 16:09:55
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-26 21:56:20
感谢参与，应助指数 +1
mahoumeimei: 金币+2, 自己已经想明白了，不过还是谢谢你的回复: ) 2013-03-07 16:09:55
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-26 21:56:20
|
做绝对定量事先不是需要制备质粒标准品来做标准曲线吗。资料上是说，通过克隆制备，提取出来的质粒DNA通过分光光度计测定浓度，再根据质量信息换算成目标基因含量，再稀释做标准曲线，得到目标基因含量和Ct值的关系。 是的，需要做标准曲线。 可是我不明白，既然通过测定样品浓度就可以计算出目标基因的含量，为什么还要多此一举，做定量PCR呢？或者说，定量PCR的意义不仅仅是这样，但如果我的目的就是得到目的基因含量的话，其实是不需要做定量PCR的？ 你说的方法可以，但是只是在同一时期时可以，因为你测得总基因组的浓度。 在不同时期你要考虑时空表达问题即不同基因在不同时期表达量不一致，即整个基因组的基因并不都是同一变化规律及速率，因此，定量PCR可以解决这个问题。 |
2楼2013-03-07 09:47:25
4楼2013-04-02 15:09:04
5楼2016-01-08 16:15:58
