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lishaohe

新虫 (小有名气)

应助: 7 (幼儿园)
金币: 56.5
帖子: 54
在线: 14.1小时
虫号: 1946467

[交流] PCR产物纯化后酶切，连接

最近需要通过PCR产物，酶切，连接转化B L21建菌库，但是PCR产物酶切，连接转化效率很低，请问各位大虾，有没有更好的办法。引物加了保护碱基。或者更好的建库方案，谢谢！

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1楼 2013-03-02 15:21:51

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Alphard02

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3.5
帖子: 27
在线: 16.2小时
虫号: 2389928

★
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引用回帖:

17楼: Originally posted by gyesang at 2013-03-05 18:57:58
如果切不开，楼主可以将PCR片段先构建在克隆载体上比如T载体，抽质粒再酶切回收你的片段，构建到目标载体上

最近用中国药典的PCR-RFLP方法鉴定川贝母，用方州华韵的商业试剂盒扩增后直接进行Sma I 酶切，可是酶切效率一直上不去。不知道将PCR产物纯化后会不会好一些？？酶用过试剂盒自带的和TaRaka的1085S，试剂盒自带体系为25μL PCR产物中直接加入1μL酶，TaRaka酶的体系为：Sma I 6μL；10* T Buffer 2μL；0.1% BSA 2μL；PCR产物5μL（测浓度为610ng/μL）；灭菌水5μL。求教问题会出在哪里？？