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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

[求助] RNA 提取如何保证质量 已有1人参与

最近在反复提取细胞RNA,但是提取出来的RNA A260/280和A260/230都在(2.0-2.1)这个范围,各位大神们给点经验,帮帮我吧
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一手生存,一手梦想
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by 追梦的人1987 at 2013-02-28 10:41:06
看吸光度,杂质好像有点多,你能上个胶图看看吗

跑了胶,出来三条带,貌似效果还可以;
就是嫌那个A260/A280有点高
一手生存,一手梦想
7楼2013-03-01 12:21:18
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

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3楼: Originally posted by 肖嘉毅 at 2013-02-28 14:41:38
你是用Trizol提取的吗?细胞的RNA很好提取的,最好用Trizol直接将细胞裂解下来。至于OD比值只是个参考,RNA最理想的不是2.0吗,我之前提组织RNA OD比值在1.65左右时跑胶也能看到挺好的结果,RNA提完后跑胶是最好的检 ...

嗯,直接裂解,都没有在冰上操作,
我想我找到原因了:加氯仿后,吸取的时候我直接用1ml的枪头吸取的,下次 要换200ul的吸取
一手生存,一手梦想
8楼2013-03-01 12:29:05
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

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4楼: Originally posted by bioluke at 2013-02-28 15:33:24
如果用的是trizol法,一开始的研磨要尽量破碎,建议液氮+超声波一起用;取上清的时候接近白层部分不要(宁缺毋滥);留下白色沉淀与管底壁后,再短暂离心吸除管壁剩余上清;OD值在1.8-2.0均可,你这个范围说明RNA有 ...

嗯,提取时间有点长,下次要加快速度
一手生存,一手梦想
9楼2013-03-01 12:29:47
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

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5楼: Originally posted by lidonghong at 2013-02-28 16:37:43
提取的RNA看质量最好的方法不是测OD值,而是跑胶观察,建议你跑个胶看看,另外提取RNA时要注意各种器具的灭酶处理,另外实验过程勤换手套。

先测了OD,然后再跑胶;
1ulRNA+4ulDEPC WATER+ 1ul 6* loading buffer
一手生存,一手梦想
10楼2013-03-01 12:31:01
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

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11楼: Originally posted by neuralcrest at 2013-03-01 16:45:11
胶结果很好,就可以了,你用它干嘛用?

RT然后PCR
一手生存,一手梦想
13楼2013-03-01 19:56:07
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

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5楼: Originally posted by lidonghong at 2013-02-28 16:37:43
提取的RNA看质量最好的方法不是测OD值,而是跑胶观察,建议你跑个胶看看,另外提取RNA时要注意各种器具的灭酶处理,另外实验过程勤换手套。

感谢各位的意见和心得啊;
小生吸取各位的经验之后,稍加改进,OD(1.85-1.90);
然后跑胶,完美呼应;
再次对大家的帮助表示感谢
一手生存,一手梦想
14楼2013-03-01 20:00:23
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

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16楼: Originally posted by 追梦的人1987 at 2013-03-01 22:55:37
如果胶图好的话,应该没问题,一般来说,OD值好并不代表提的好,如果跑胶好的话,提的就应该没问题,不知道你说的貌似可以是怎么回事...

结果可以,往下进行
一手生存,一手梦想
17楼2013-03-04 08:17:05
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