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snoopyzxx

木虫 (著名写手)


[交流] 做共表达,用什么克隆方法比较好呢?

最近准备做共表达,需要将多个基因克隆入一个载体中进行共表达。
现在有以下方法可供选择:
1、传统的酶切连接方法:通过多次酶切连接操作,容易理解,但操作繁琐。
2、LIC
3、SLIC
4、Gibson
5、CPEC
6、OE-PCR克隆

其中,后面几种方法总体差不多,但具体策略不是太一样,不知道具体用什么方法好?
有没有比较详细点的综述文章对这几个方法进行比较?
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veterinary

金虫 (小有名气)


★
snoopyzxx(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
3楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-02-21 22:09:41
2我不知道你指的具体步骤是什么

SliC和Gibson很像,但是效率低不少,gibson已经有试剂盒卖了,如果舍得花钱倒是很方便
6和5没有本质区别,我自己做3,4,5时候也都习惯P成两个大片段最后再成环,效率高点
我能感 ...

请问,如果有小片段需要怎么改变方法啊?

发自小木虫Android客户端
12楼2016-01-24 23:57:06
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)


★
snoopyzxx(金币+1): 谢谢参与
2我不知道你指的具体步骤是什么

SliC和Gibson很像,但是效率低不少,gibson已经有试剂盒卖了,如果舍得花钱倒是很方便
6和5没有本质区别,我自己做3,4,5时候也都习惯P成两个大片段最后再成环,效率高点
我能感觉到的区别就是PCR方法有时候在连接处会多一些碱基(各种原因),SliC和Gibson如果有个片段比较小得话需要重新考虑步骤。
综述还没有吧,有几个方法还在优化
3楼2013-02-21 22:09:41
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)


引用回帖:
3楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-02-21 22:09:41
2我不知道你指的具体步骤是什么

SliC和Gibson很像,但是效率低不少,gibson已经有试剂盒卖了,如果舍得花钱倒是很方便
6和5没有本质区别,我自己做3,4,5时候也都习惯P成两个大片段最后再成环,效率高点
我能感 ...

为什么会多碱基呢?引物设计的原因还是错误位置退火的原因?
如果是多个基因连到一个载体的话,用cpec或OEpcr效率应该比常规酶切连接高很多,因为都需要设计引物,都需要PCR。而cpec方法可以在PCR的同时完成连接反应。

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4楼2013-02-21 22:24:24
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)


多片段fusionPcr没问题,成环还是算了。多碱基反正是各种原因,有些比较诡异,不过一般多挑两克隆就行,比较麻烦的是末端有重复序列

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2013-02-21 22:31:05
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2016-11-16 22:39   回复  
snoopyzxx(金币+1): 谢谢参与
, 发自小木虫Android客户端
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