24小时热门版块排行榜    

查看: 2989  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)


[交流] 做共表达,用什么克隆方法比较好呢?

最近准备做共表达,需要将多个基因克隆入一个载体中进行共表达。
现在有以下方法可供选择:
1、传统的酶切连接方法:通过多次酶切连接操作,容易理解,但操作繁琐。
2、LIC
3、SLIC
4、Gibson
5、CPEC
6、OE-PCR克隆

其中,后面几种方法总体差不多,但具体策略不是太一样,不知道具体用什么方法好?
有没有比较详细点的综述文章对这几个方法进行比较?
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 分子生物学 蛋白表达纯化鉴定精华 学习

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)


★
snoopyzxx(金币+1): 谢谢参与
2我不知道你指的具体步骤是什么

SliC和Gibson很像,但是效率低不少,gibson已经有试剂盒卖了,如果舍得花钱倒是很方便
6和5没有本质区别,我自己做3,4,5时候也都习惯P成两个大片段最后再成环,效率高点
我能感觉到的区别就是PCR方法有时候在连接处会多一些碱基(各种原因),SliC和Gibson如果有个片段比较小得话需要重新考虑步骤。
综述还没有吧,有几个方法还在优化
3楼2013-02-21 22:09:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

snoopyzxx

木虫 (著名写手)


引用回帖:
3楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-02-21 22:09:41
2我不知道你指的具体步骤是什么

SliC和Gibson很像,但是效率低不少,gibson已经有试剂盒卖了,如果舍得花钱倒是很方便
6和5没有本质区别,我自己做3,4,5时候也都习惯P成两个大片段最后再成环,效率高点
我能感 ...

为什么会多碱基呢?引物设计的原因还是错误位置退火的原因?
如果是多个基因连到一个载体的话,用cpec或OEpcr效率应该比常规酶切连接高很多,因为都需要设计引物,都需要PCR。而cpec方法可以在PCR的同时完成连接反应。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2013-02-21 22:24:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)


多片段fusionPcr没问题,成环还是算了。多碱基反正是各种原因,有些比较诡异,不过一般多挑两克隆就行,比较麻烦的是末端有重复序列

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2013-02-21 22:31:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

30937747

木虫 (小有名气)


★
snoopyzxx(金币+1): 谢谢参与
有一种方法,叫Red/ET,一次性连两个基因的可以用三重同源重组
6楼2013-02-22 16:32:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
2016-11-16 22:39   回复  
snoopyzxx(金币+1): 谢谢参与
, 发自小木虫Android客户端
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 3/150 2026-11-11 11:10 by 1Nb0IVlmV6v0
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 4/200 2026-11-11 10:54 by 1Nb0IVlmV6v0
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 10:43 by 1Nb0IVlmV6v0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 6/300 2026-11-11 10:32 by 1Nb0IVlmV6v0
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 10:13 by 1Nb0IVlmV6v0
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 5/250 2026-11-11 10:10 by 1Nb0IVlmV6v0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 13/650 2026-11-11 09:22 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-11 09:20 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 4/200 2026-11-11 08:34 by 1Nb0IVlmV6v0
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 04:40 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 03:56 by Z7qfCsdIiD1T
[考博] 申请环境,微生物方向博士 +3 浅笑09 2026-11-08 3/150 2026-11-10 12:44 by 可淡不可忘
[考博] 27博士申请 +3 白白白ly 2026-11-09 3/150 2026-11-09 21:39 by szq0819
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 5/250 2026-11-09 16:53 by 张丹枫1991
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-09 13:26 by Equinoxhua
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
信息提示
请填处理意见