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shiliyusly

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[求助] QPCR之引物设计

大家好!我又来请教QPCR的有关知识了
有个基因QPCR后我发现溶解曲线并不是很好,下图1是5个不同成熟度杨梅该基因的溶解曲线比较图。
我想重新设计引物,可是primer5显示我设计的引物挺好的,如图2。
图3和图4是上下游引物的internal stability,我看资料是说3端绝对值要小于9比较好。
所以我现在有点困惑了,不知道问题出在哪里,重新设计引物的话都不知道要怎么设计才会比之前那个引物好了,因为我感觉之前那个引物已经很好了。
麻烦高手帮忙解惑,谢谢啊!

图4下游引物.jpg



图1.jpg



图2.jpg



图3上游引物.jpg
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