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气球猫

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR电泳结果分析,跪求解答

我重复了有4、5次,但每次做出来都是这种结果。求解为什么引物1扩增出来的产物会是"W"形,而另一个引物就好好的。
说明:图1,左边是引物2(aqp4)的PCR结果,右边是引物1(aqp3)的结果
如果哪位虫友有比较好的引物,求赐教,万分感谢了!!

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气球猫

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by huiniss at 2013-02-18 08:43:54
楼主的标准条带也是U型的啊,应该不是引物的问题。可以考虑电泳系统参数问题,改善一下参数。例如EB染色下1.5%琼脂糖凝胶电泳50V,1.5-2h

嗯,谢谢您的建议,电压我一直用的是75V,之前marker都是正常的,但是换了个实验室的条件,400bp以上似乎经常出现条带扭曲
9楼2013-02-19 00:45:57
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huiniss

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-02-18 14:11:57
楼主的标准条带也是U型的啊,应该不是引物的问题。可以考虑电泳系统参数问题,改善一下参数。例如EB染色下1.5%琼脂糖凝胶电泳50V,1.5-2h
2楼2013-02-18 08:43:54
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-02-18 14:11:48
楼主的PCR产物是在同一块胶上跑电泳的,应该是配的胶不均匀的问题,所以可能会有跑成W形的,重新制胶,再跑下。
楼主引物一的特异性好像不怎么好,有非特异性的扩增,建议重新设计引物。
风雪夜归人
3楼2013-02-18 09:11:30
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是跑的电压还是电流有问题?楼上有人提到过marker也跑得不整齐,一切以marker为准
有非特异性扩增,如果是为了克隆的话,切胶也无所谓
在排除了胶或电流电压的原因后,也可以减少上样量试试
你的日子如何,你的力量也必如何!
4楼2013-02-18 15:29:06
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