应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR电泳结果分析，跪求解答
121/2返回列表12下一页
查看: 2153  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

气球猫

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR电泳结果分析，跪求解答

我重复了有4、5次，但每次做出来都是这种结果。求解为什么引物1扩增出来的产物会是"W"形，而另一个引物就好好的。
说明：图1，左边是引物2(aqp4)的PCR结果，右边是引物1(aqp3)的结果
如果哪位虫友有比较好的引物，求赐教，万分感谢了！！

1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-02-17 22:32:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huiniss

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-02-18 14:11:57
楼主的标准条带也是U型的啊，应该不是引物的问题。可以考虑电泳系统参数问题，改善一下参数。例如EB染色下1.5%琼脂糖凝胶电泳50V，1.5-2h
赞一下 回复此楼
2楼2013-02-18 08:43:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-02-18 14:11:48
楼主的PCR产物是在同一块胶上跑电泳的，应该是配的胶不均匀的问题，所以可能会有跑成W形的，重新制胶，再跑下。
楼主引物一的特异性好像不怎么好，有非特异性的扩增，建议重新设计引物。
赞一下 回复此楼
风雪夜归人
3楼2013-02-18 09:11:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是跑的电压还是电流有问题？楼上有人提到过marker也跑得不整齐，一切以marker为准
有非特异性扩增，如果是为了克隆的话，切胶也无所谓
在排除了胶或电流电压的原因后，也可以减少上样量试试
赞一下 回复此楼
你的日子如何，你的力量也必如何！
4楼2013-02-18 15:29:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

duane

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不是引物的问题，应该是你电泳出的问题。marker也有些弯曲
赞一下 回复此楼
5楼2013-02-18 15:56:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

daniel_tang

金虫 (小有名气)

红魔

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感覺是電泳的問題。不如把左邊的和右邊的互換一下，用?砼懦@個因素。
赞一下 回复此楼
player,gamer,lifer
6楼2013-02-18 17:12:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

寒冰利剑

金虫 (小有名气)
根据marker的条带，应该是胶制的有问题
赞一下 回复此楼
岂能尽如人意，但求无愧我心。
7楼2013-02-19 00:28:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

气球猫

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wqj1988926 at 2013-02-18 09:11:30
楼主的PCR产物是在同一块胶上跑电泳的，应该是配的胶不均匀的问题，所以可能会有跑成W形的，重新制胶，再跑下。
楼主引物一的特异性好像不怎么好，有非特异性的扩增，建议重新设计引物。

胶都是完全溶解然后选定同一个地方一次把胶倒下去，应该不是胶不均匀的问题。但是您说的有非特异性条带，我确实也注意到了，打算重新设计再做！
赞一下 回复此楼
8楼2013-02-19 00:44:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

气球猫

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huiniss at 2013-02-18 08:43:54
楼主的标准条带也是U型的啊，应该不是引物的问题。可以考虑电泳系统参数问题，改善一下参数。例如EB染色下1.5%琼脂糖凝胶电泳50V，1.5-2h

嗯，谢谢您的建议，电压我一直用的是75V，之前marker都是正常的，但是换了个实验室的条件，400bp以上似乎经常出现条带扭曲
赞一下 回复此楼
9楼2013-02-19 00:45:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

气球猫

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sxxuan at 2013-02-18 15:29:06
是不是跑的电压还是电流有问题？楼上有人提到过marker也跑得不整齐，一切以marker为准
有非特异性扩增，如果是为了克隆的话，切胶也无所谓
在排除了胶或电流电压的原因后，也可以减少上样量试试

胶应该是均匀的，我左边右边都上样过引物1的扩增产物，都会出现类似的现象。不过好像400bp以上，我跑的这几次marker都有点扭曲，不知道该怎么解决了
赞一下 回复此楼
10楼2013-02-19 00:47:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 气球猫 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭