24小时热门版块排行榜    

查看: 3906  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

格子和潇潇

铜虫 (小有名气)

[求助] Western Blot结果 条带中间 不见了,请教高手!

第一次A样本,用B抗体曝光如下图:


第二次B样本,用同样的B抗体曝光出现了2条带,好像是中空的,两次的二抗浓度都是一样的,都是1:5000,可能是有些高,但是为啥第一次曝光就没事呢?


请教各位高手
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoqi5992

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我看你说两次蛋白样品不一样,你是不是可以尝试再用A样品做一次呢。
我感觉有可能是你的蛋白存在一些修饰,使它分子量产生了变化吧?只是可能啊
9楼2013-02-04 15:18:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析,欢迎交流 2013-02-03 09:32:08
问题可能有两种情况:
一:本身应该是一条带,由于电泳、转膜或者暴光胶片等原因,出现两条带。
二:抗体识别分子量接近的两条带,第一次由于抗体过强或者是电泳的原因,两条带没有分开。
我感觉第二种情况的可能性更大一些。
2楼2013-02-02 12:12:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

格子和潇潇

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-02 12:12:22
问题可能有两种情况:
一:本身应该是一条带,由于电泳、转膜或者暴光胶片等原因,出现两条带。
二:抗体识别分子量接近的两条带,第一次由于抗体过强或者是电泳的原因,两条带没有分开。
我感觉第二种情况的可能 ...

一抗为单克隆抗体,本身应该为一条带;
电泳、转膜都没问题,其他一起的内参背景较浓,很可能是二抗浓度大或者没洗好的原因;
曝光时间短或者长都是这个情况;
马上要回家了,也来不及验证了
3楼2013-02-02 12:53:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-02-03 09:33:55
第一次的曝光时间太长了
曝光要在看的出各泳道差异的情况下尽量浅一些
第二次的没问题
可能是抗体特异性/蛋白异构体/降解/修饰 各种原因
4楼2013-02-02 20:31:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 311求调剂 +5 26研0 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:21 by a不易
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:58 by 漾漾123sun
[考研] 344求调剂 +3 knight344 2026-03-16 3/150 2026-03-16 09:42 by 无际的草原
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化,一志愿:哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[基金申请] 面上和青基一样限30页不合理 +5 wowsunflower 2026-03-10 7/350 2026-03-14 17:21 by kingkocxr
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧, 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 一志愿华中农业大学071010,总分三百二,求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:35 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:30 by JourneyLucky
[考研] b区环境工程求调剂 +4 Maps1 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:23 by JourneyLucky
[考研] 26考研调剂 +3 ying123. 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:18 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 420求调剂 +4 莫向外求11 2026-03-10 6/300 2026-03-12 14:41 by ruiyingmiao
[考研] 085600 材料与化工 295 求调剂 +10 dream…… 2026-03-10 12/600 2026-03-12 13:46 by dream……
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考研] 收调剂 +7 调剂的考研学生 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:57 by 麦茶汤圆
信息提示
请填处理意见