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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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格子和潇潇

铜虫 (小有名气)

[求助] Western Blot结果 条带中间 不见了,请教高手!

第一次A样本,用B抗体曝光如下图:


第二次B样本,用同样的B抗体曝光出现了2条带,好像是中空的,两次的二抗浓度都是一样的,都是1:5000,可能是有些高,但是为啥第一次曝光就没事呢?


请教各位高手
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格子和潇潇

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-02 12:12:22
问题可能有两种情况:
一:本身应该是一条带,由于电泳、转膜或者暴光胶片等原因,出现两条带。
二:抗体识别分子量接近的两条带,第一次由于抗体过强或者是电泳的原因,两条带没有分开。
我感觉第二种情况的可能 ...

一抗为单克隆抗体,本身应该为一条带;
电泳、转膜都没问题,其他一起的内参背景较浓,很可能是二抗浓度大或者没洗好的原因;
曝光时间短或者长都是这个情况;
马上要回家了,也来不及验证了
3楼2013-02-02 12:53:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析,欢迎交流 2013-02-03 09:32:08
问题可能有两种情况:
一:本身应该是一条带,由于电泳、转膜或者暴光胶片等原因,出现两条带。
二:抗体识别分子量接近的两条带,第一次由于抗体过强或者是电泳的原因,两条带没有分开。
我感觉第二种情况的可能性更大一些。
2楼2013-02-02 12:12:22
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ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-02-03 09:33:55
第一次的曝光时间太长了
曝光要在看的出各泳道差异的情况下尽量浅一些
第二次的没问题
可能是抗体特异性/蛋白异构体/降解/修饰 各种原因
4楼2013-02-02 20:31:30
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格子和潇潇

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ccharlien at 2013-02-02 20:31:30
第一次的曝光时间太长了
曝光要在看的出各泳道差异的情况下尽量浅一些
第二次的没问题
可能是抗体特异性/蛋白异构体/降解/修饰 各种原因

如果曝光太浅,虽然也有差异,毕竟不好看;
抗体单克隆,“各种原因”实在难以想象,不知有没有同学有过类似情况
5楼2013-02-02 23:05:58
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