24小时热门版块排行榜    

查看: 1725  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

飞飞050227

金虫 (小有名气)

[求助] western-blot求助,急急急!!求指点求建议!!!

做了两个月了,刚开始没一点信号后来好不容易有信号了可是整个泳道都亮,发帖有亲们说是上样量太大还有亲说2抗浓度太大,结果做了上样量梯度和抗体浓度梯度都没有什么改善,上图几张希望懂的亲们细心看完给予指点……7个不同的处理不要求目标条带,就看不同处理蛋白质表达量的不同,染过转膜后的胶基本没问题,第一张是每孔上35μL样品,二抗1:40,第二张是做的上样量梯度从左到右依次是30μL、25μL、20μL、15μL、10μL、5μL、2μL上样量最小的2个都没信号,10微升的又是没条带的地方也亮
第三张图是2抗浓度梯度左边是1:80,中间1:100,最右边1:200后边2个浓度干脆就没信号了……我实在是走投无路不知道该肿么办,封闭25°摇床一个小时一抗4°过夜,PBS/T洗4次每次15分钟,二抗25°一个半小时PBS/T洗4次每次15分钟……求指点!!

dell 2013-01-16



dell 2013-01-18 12 小时 08 分钟_Exposure_116.8sec.jpg



dell 2013-01-21 12 小时 56 分钟_Exposure_180.0sec.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

生命不息,实验不止!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)

Tortoise

文献杰出贡献

换个二抗试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
Dripping Concentrated!!energetic and active!
3楼2013-01-21 15:54:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
飞飞050227: 金币+1, 有帮助 2013-01-21 16:26:52
你用的是什么检测系统?二抗说明上有建议稀释倍数吧。我用的二抗是联HRP的,稀释倍数是1:20-50万倍。
2楼2013-01-21 15:49:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞飞050227

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hxswdl at 2013-01-21 15:54:44
换个二抗试试

我的所有东西都是试剂盒带的……是按照试剂盒里的说明稀释的2抗
生命不息,实验不止!
4楼2013-01-21 16:22:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞飞050227

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-21 15:49:04
你用的是什么检测系统?二抗说明上有建议稀释倍数吧。我用的二抗是联HRP的,稀释倍数是1:20-50万倍。

我的是millipore的羰基化检测试剂盒,1抗2抗都是试剂盒里的,试剂盒说明书上建议的2抗稀释倍数是1:300但是我做的2抗浓度梯度200的时候就已经没信号了
生命不息,实验不止!
5楼2013-01-21 16:24:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +37 医学老男孩 2026-08-13 87/4350 2026-08-18 06:35 by 医学老男孩
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见