| 查看: 2687 | 回复: 9 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
原核表达和SDS-PAGE
|
|||
|
我做的4个基因的克隆 然后转到pET-28a上了，然后进行了一系列的检测，都合适了，最后跑SDS-PAGE，具体操作如下： 将检测合适的转到BL21(DE3)里的保存的菌液 摇菌 37度过夜； 第二天，1:50的比例转摇； OD600=0.6-0.8时停止转摇（时间是下午2点）， 然后置于4度，待晚上7点加IPTG诱导，28度，过夜（体积为20ml） 次日，将诱导好的，没有诱导的，离心，收集上清，并将沉淀加灭过菌的水稀释至总体积为20ml,然后超声波处理 然后跑SDS-PAGE， 浓缩胶为4% 分离胶为12% 结果什么都没有 不知道为什么 文献上看别人都是这样做的啊 为什么我的就是不行呢？ 麻烦大家帮忙分析一下！ 谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有110人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 做过跨膜蛋白原核表达的战友过来看看哦
已经有18人回复
- 原核表达形成了包涵体怎么办啊？
已经有22人回复
- 原核表达 PET-30载体 目的蛋白分子量偏小？
已经有18人回复
- 有关蛋白表达的问题
已经有25人回复
- 汉译英 生物学方向
已经有1人回复
- 原核表达中SDS-PAGE上样量如何确定？
已经有7人回复
- 原核表达菌液裂解
已经有14人回复
- 推荐一本很实用的入门教材：分子生物学与基因工程实验教程
已经有27人回复
- 膜蛋白表达问题
已经有15人回复
- 原核表达SDS-PAGE问题
已经有7人回复
- 求助 原核表达WB 多条带
已经有11人回复
- 【求助】真核基因在原核生物表达
已经有4人回复
- 【求助】 关于原核表达【有效日期截止：2011年2月28日】
已经有7人回复
- 【求助/交流】含咪唑的蛋白免疫兔子
已经有11人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
酶切专家
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 96 (初中生)
- 金币: 1610.8
- 红花: 4
- 帖子: 149
- 在线: 41.3小时
- 虫号: 1648414
- 注册: 2012-02-27
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
你用的是Novagen的pET系统，建议你参考pET系统操作手册，这可能是做原核表达最经典的实验手册。 http://lifeserv.bgu.ac.il/wb/zar ... system%20manual.pdf 里面有关于pET系统的表达，纯化等相关的具体信息，祝好运！ |
5楼2013-01-08 21:49:17
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
2楼2013-01-08 14:50:15
3楼2013-01-08 21:02:29
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 2891.1
- 散金: 1276
- 红花: 43
- 帖子: 2259
- 在线: 277.9小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
4楼2013-01-08 21:25:54
30