| 查看: 2295 | 回复: 9 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
原核表达和SDS-PAGE
|
||
|
我做的4个基因的克隆 然后转到pET-28a上了，然后进行了一系列的检测，都合适了，最后跑SDS-PAGE，具体操作如下： 将检测合适的转到BL21(DE3)里的保存的菌液 摇菌 37度过夜； 第二天，1:50的比例转摇； OD600=0.6-0.8时停止转摇（时间是下午2点）， 然后置于4度，待晚上7点加IPTG诱导，28度，过夜（体积为20ml） 次日，将诱导好的，没有诱导的，离心，收集上清，并将沉淀加灭过菌的水稀释至总体积为20ml,然后超声波处理 然后跑SDS-PAGE， 浓缩胶为4% 分离胶为12% 结果什么都没有 不知道为什么 文献上看别人都是这样做的啊 为什么我的就是不行呢？ 麻烦大家帮忙分析一下！ 谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有127人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 做过跨膜蛋白原核表达的战友过来看看哦
已经有18人回复
- 原核表达形成了包涵体怎么办啊？
已经有22人回复
- 原核表达 PET-30载体 目的蛋白分子量偏小？
已经有18人回复
- 有关蛋白表达的问题
已经有25人回复
- 汉译英 生物学方向
已经有1人回复
- 原核表达中SDS-PAGE上样量如何确定？
已经有7人回复
- 原核表达菌液裂解
已经有14人回复
- 推荐一本很实用的入门教材：分子生物学与基因工程实验教程
已经有27人回复
- 膜蛋白表达问题
已经有15人回复
- 原核表达SDS-PAGE问题
已经有7人回复
- 求助 原核表达WB 多条带
已经有11人回复
- 【求助】真核基因在原核生物表达
已经有4人回复
- 【求助】 关于原核表达【有效日期截止：2011年2月28日】
已经有7人回复
- 【求助/交流】含咪唑的蛋白免疫兔子
已经有11人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 2994.6
- 散金: 1276
- 红花: 43
- 帖子: 2258
- 在线: 277.2小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
4楼2013-01-08 21:25:54
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
2楼2013-01-08 14:50:15
3楼2013-01-08 21:02:29
酶切专家
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 96 (初中生)
- 金币: 1610.8
- 红花: 4
- 帖子: 149
- 在线: 41.3小时
- 虫号: 1648414
- 注册: 2012-02-27
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
你用的是Novagen的pET系统，建议你参考pET系统操作手册，这可能是做原核表达最经典的实验手册。 http://lifeserv.bgu.ac.il/wb/zar ... system%20manual.pdf 里面有关于pET系统的表达，纯化等相关的具体信息，祝好运！ |
5楼2013-01-08 21:49:17
