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原核表达和SDS-PAGE
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我做的4个基因的克隆 然后转到pET-28a上了，然后进行了一系列的检测，都合适了，最后跑SDS-PAGE，具体操作如下： 将检测合适的转到BL21(DE3)里的保存的菌液 摇菌 37度过夜； 第二天，1:50的比例转摇； OD600=0.6-0.8时停止转摇（时间是下午2点）， 然后置于4度，待晚上7点加IPTG诱导，28度，过夜（体积为20ml） 次日，将诱导好的，没有诱导的，离心，收集上清，并将沉淀加灭过菌的水稀释至总体积为20ml,然后超声波处理 然后跑SDS-PAGE， 浓缩胶为4% 分离胶为12% 结果什么都没有 不知道为什么 文献上看别人都是这样做的啊 为什么我的就是不行呢？ 麻烦大家帮忙分析一下！ 谢谢！ |
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3楼2013-01-08 21:02:29
cicelyzh
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4楼2013-01-08 21:25:54
酶切专家
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- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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你用的是Novagen的pET系统，建议你参考pET系统操作手册，这可能是做原核表达最经典的实验手册。 http://lifeserv.bgu.ac.il/wb/zar ... system%20manual.pdf 里面有关于pET系统的表达，纯化等相关的具体信息，祝好运！ |
5楼2013-01-08 21:49:17
