| 查看: 805 | 回复: 1 | ||
| 本帖产生 1 个 翻译EPI ，点击这里进行查看 | ||
huojinlong9287银虫 (小有名气)
|
[求助]
汉译英 生物学方向
|
|
| 为了构建绿色荧光蛋白AcGFP1基因的原核表达载体pET32a-AcGFP1，并通过诱导使其在大肠杆菌中高效表达，本研究以pIRES-AcGFP1质粒为模板，采用PCR技术特异性扩增绿色荧光蛋白（AcGFP1）基因，并通过酶切和连接使其与原核表达载体pET32a（+）构成重组子，经PCR、酶切和测序鉴定后，重组质粒转化大肠杆菌Rosetta（DE3），用不同浓度的异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达绿色荧光蛋白，并通过15%SDS-PAGE鉴定。结果显示重组质粒pET32a-AcGFP1中的AcGFP1序列与Clontech公司的pIRES-AcGFP1质粒的AcGFP1序列完全一致，说明成功构建了含有绿色荧光蛋白AcGFP1的原核表达质粒。pET32a-AcGFP1转化大肠杆菌感受态细胞Rosetta（DE3）后，经不同浓度的IPTG诱导后均获得高效表达。SDS-PAGE验证的目的蛋白相对分子量约为44000Da，与理论预期值相符。 |
回复此楼» 猜你喜欢
北京211副教授，35岁，想重新出发，去国外做博后，怎么样？
已经有8人回复
-
Cas 72-43-5需要30g，定制合成，能接单的留言
已经有7人回复
-
磺酰氟产物，毕不了业了！
已经有5人回复
-
论文终于录用啦！满足毕业条件了
已经有25人回复
-
2026年机械制造与材料应用国际会议 （ICMMMA 2026）
已经有3人回复
-
自荐读博
已经有3人回复
-
求助:我三月中下旬出站，青基依托单位怎么办？
已经有5人回复
-
不自信的我
已经有5人回复
-
投稿Elsevier的杂志（返修），总是在选择OA和subscription界面被踢皮球
已经有8人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
爱与雨下(金币+2): 鼓励一下！~ 2011-09-09 12:08:09
huojinlong9287(金币+60, 翻译EPI+1): 翻译的不完全 2011-09-11 09:22:48
sltmac(金币+10): 2011-09-15 08:02:01
sltmac(金币+10): 2011-09-15 08:02:05
sltmac: 欢迎常来本版交流~ 2011-09-15 08:02:14
爱与雨下(金币+2): 鼓励一下！~ 2011-09-09 12:08:09
huojinlong9287(金币+60, 翻译EPI+1): 翻译的不完全 2011-09-11 09:22:48
sltmac(金币+10): 2011-09-15 08:02:01
sltmac(金币+10): 2011-09-15 08:02:05
sltmac: 欢迎常来本版交流~ 2011-09-15 08:02:14
| The aim of this study was to construct prokaryotic expression vector pET32a-AcGFP1, and its high level expression in E. coli cell. AcGFP1 gene was amplified from vector pIRES-AcGFP1 by PCR method, and was inserted into prokaryotic expression vector pET32a(+). The resulting pET32a-AcGFP1 was transformed into E. coli Rosetta(DE3) for expression followed by induction with isopropyl β-D-thiogalactopyranoside (IPTG). Whole-cell extracts were separated on 15% SDS-PAGE. AcGFP1 gene in pET32a-AcGFP1 was consistent with related gene in pIRES-AcGFP1 from Clontech Ltd, indicating prokaryotic expression vector with AcGFP1 gene was constructed successfully. High level expression was conducted with transformed E. coli Rosetta(DE3) after IPTG induction. A strong induction of a 44 kD protein was detected in SDS-PAGE, which was in correspondence with the theoretic value. |
2楼2011-09-09 11:18:49