24小时热门版块排行榜    

查看: 2830  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

475502411

铜虫 (著名写手)

[求助] 蛋白的表达量低不稳定怎么办

我在做肌红蛋白的原核表达,但是表达水平很低,但活性还可以。本来带有His标签,但是挂不上柱,用SP柱可以除去部分杂蛋白,但是透析的时候蛋白就会沉淀下来,离心后上清活性也是可以的,继续做稳定性时发现在4℃的稳定性很差,3周就降解的差不多没有了,但-20℃没问题是稳定的。
现在请假大家:
1.如何提高表达量,我是从温度、时间、IPTG浓度都试过了
2.如何提高稳定性,我的Buffer是20/25mM Tris pH7.5  1mM EDTA、0.02%叠氮钠  0.01%SDS

因为蛋白再透析时就产生沉淀,但上清仍有活性,我改变过他们的pH
和含氯化钠的量,最高加到100mM,但是透析还是有沉淀
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

可以朝九晚五,也能浪迹天涯
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nlbtr

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

嗯,甘油可以增强稳定性,还有,你确定原核表达是最佳的解决方案么?个人觉得真核会更好些。
7楼2013-01-11 09:12:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
475502411: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-01-06 16:34:13
肌红蛋白蛋白结合heme,一般的说结合cofactor后的蛋白比apo形式更稳定。你试试在缓冲液中加点铁。
2楼2013-01-06 15:10:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

475502411

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-06 15:10:34
肌红蛋白蛋白结合heme,一般的说结合cofactor后的蛋白比apo形式更稳定。你试试在缓冲液中加点铁。

三氯化铁吗?浓度多高呢?
谢谢
可以朝九晚五,也能浪迹天涯
3楼2013-01-06 16:34:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 475502411 at 2013-01-06 16:34:02
三氯化铁吗?浓度多高呢?
谢谢...

活性形式应该是二价铁,10μM FeSO4,母液在酸性形式下配置。在空气中二价铁会氧化成三价铁。
4楼2013-01-07 02:39:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +3 羊腰板 2026-08-21 3/150 2026-08-21 19:42 by kulium
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 让我中一个面上吧! +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +23 yaoyewhu2008 2026-08-20 25/1250 2026-08-21 12:19 by Poppy1104
[基金申请] 什么时候开奖? +7 CrisMessi 2026-08-18 7/350 2026-08-21 12:15 by weiyin
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
信息提示
请填处理意见