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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR疑惑求助
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emingju

银虫 (小有名气)

[求助] PCR疑惑求助

我之前做的PCR很稳定，效果也很好，最近不知道为什么，同样的条件竟然效果差很多，引物带很重，目的片段并不是很亮，这对我后期的实验影响很大，我还特意用之前的模板重新做了一次PCR，结果效果还是不如之前的，大家帮助我指点一下！万分感激！

PCR 现在的.jpg



PCR之前的.jpg
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1楼 2012-12-24 20:16:52
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森林有木

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 也许可以 2012-12-25 09:53:35
可能是引物和模板时间长了降解了，换新的试试
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笑笑别人 笑笑自己
2楼2012-12-24 21:56:37
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emingju

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 森林有木 at 2012-12-24 21:56:37
可能是引物和模板时间长了降解了，换新的试试

引物是我新订的啊，模板只有这些了，没有样品了！还有什么办法吗
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3楼2012-12-24 22:10:39
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+2, 鼓励交流 尤其是手机党 2012-12-25 09:53:08
我觉得你扩增的很好，跑在最前面的像是产物。而且凝胶背景很亮，说明很脏，建议换电泳相关的试剂，重新跑试试。也建议你加个marker，这样可以对照着估计浓度。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2012-12-25 08:22:57
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ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 鼓励交流 好多手机党 2012-12-25 09:53:23
看起来扩增效率低了不少，引物新订的纯化方法变了？换一套新开的酶试试呢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2012-12-25 09:06:36
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冰月鑫

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可能酶等药品时间长了，经过反复的冻融，效果就会下降，可以尝试缓缓其他酶！
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6楼2013-03-07 20:54:00
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emingju

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 冰月鑫 at 2013-03-07 20:54:00
可能酶等药品时间长了，经过反复的冻融，效果就会下降，可以尝试缓缓其他酶！

嗯 后来找到原因了，是引物的原因，还是很感谢！
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7楼2013-03-09 16:36:28
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carl_mei

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用PCR产物再扩增一遍试试
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永远不走捷径！永远不对可能坏的事情好奇！永远不在仇恨和痛苦中做决定！
8楼2013-03-15 16:48:54
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