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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒测序后发现有重叠现象
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Cllair

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒测序后发现有重叠现象

之前将克隆的基因直接送测序一直说有重叠现象得不到测序结果。上次将转化后的大肠杆菌提取质粒送测序，结果还是有重叠现象。。。有点濒临崩溃的边缘，十分想请教各位虫友，大家有没有遇到过类似的情况，怎么解决的啊。
还有就是我想着直接送转化后的大肠杆菌去测序，之前查过资料说菌样测序的话结果可能不如质粒好。。。能给点相关的建议不？
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有今生没来世，且行且珍惜。
1楼2012-12-18 19:57:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果质粒没有提好会影响测序结果。首先确定一定要挑单克隆。有时候两个克隆靠在一起的不要用。筛到了阳性克隆，可以直接送菌液测序。
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2楼2012-12-19 09:07:45
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fuding6

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
多换几个公司测试试
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3楼2012-12-19 10:43:11
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Cllair

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-19 09:07:45
如果质粒没有提好会影响测序结果。首先确定一定要挑单克隆。有时候两个克隆靠在一起的不要用。筛到了阳性克隆，可以直接送菌液测序。

我这次把之前单克隆影印的菌落摇菌送测序的应该没问题吧？其实我一直都调单菌落的，这个基因自从在我师姐手里的时候就测序过很多次，一直因为重叠没有得到序列，我都开始怀疑这个基因本身有问题了。。。
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有今生没来世，且行且珍惜。
4楼2012-12-19 11:11:58
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Cllair

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fuding6 at 2012-12-19 10:43:11
多换几个公司测试试

我们一直都在生工测序，请问你有什么比较给力的公司可以推荐吗？
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有今生没来世，且行且珍惜。
5楼2012-12-19 11:17:24
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btx362237729

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
invitrogen的测序还是不错的
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人生最黑暗的时光终于过去了
6楼2012-12-19 16:18:37
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你送菌测序前，最好把菌纯化一下
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7楼2012-12-19 17:28:24
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liguanying

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果用的通用引物测序，你向测序公司要一下，他们测序用的引物，然后和你的基因序列比对一下。看看是不是和你的基因序列有同源性。如果你用的是自己的基因引物测序，看一下你的引物是不是特异性不好。
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8楼2012-12-19 18:50:22
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Cllair

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by btx362237729 at 2012-12-19 16:18:37
invitrogen的测序还是不错的

谢谢，我会考虑把换测序公司作为备选。
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9楼2012-12-20 09:26:10
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Cllair

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 小丹木木 at 2012-12-19 17:28:24
你送菌测序前，最好把菌纯化一下

得人指点，我正在做纯化，谢谢
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有今生没来世，且行且珍惜。
10楼2012-12-20 09:26:59
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