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hwchen2000金虫 (正式写手)
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[求助]
RT-PCR高手请进
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我现在做RT-PCR多次，只有一次做第二链合成电泳后显示有约1000bp的条带，但是再也没有重复出来，所以想请教一下各位高手 RNA模板约1ug 我的PCR引物是 forwards: 5'-ggatatcATGGCAGCCANAGATGCTTGTATTG-3' rewards: 5'-cccaagcttCTAGAATGCAGCACCAACGAAGGGT-3' （小写为保护碱基） 请大侠帮我验证这个引物的退火温度，我现在是55℃ 求教了！！ |
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 PCR技术 | 分子生化实验经验积累 |
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
hwchen2000: 金币+5 2013-01-02 11:10:17
hwchen2000: 金币+5 2013-01-02 11:10:17
| 1000bp根本不算大！第一用内参基因扩一下 ，确认模版能用，也确认你的PCR所有试剂能用。第二退火温度用三倍GC+2倍的AT算一下，我感觉退火温度可能太低了。第三，把你出条带那个PCR产物再跑一下，看有没有条带了，如果有，看多亮，太亮的话要稀释的。 |
hwchen20008楼2012-12-21 21:52:01
zhaodahe
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3楼2012-12-18 12:32:59
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