| 查看: 1052 | 回复: 14 | |||
[求助]
蛋白表达问题
|
|
本人做一个大肠杆菌本身酶蛋白的外源表达，具体如下： 将大肠这个目的片段在ecogene中查出，然后设计引物PCR，连到pMD-18T上，转录DH5α中，酶切验证测序全部正确；在连接到pET-28a上，转录BL21（DE3）中，酶切验证测序也全部正确。5-30mM IPTG诱导，20℃、30℃、37℃温度梯度也都设了，还换了宿主细胞Rosetta中，还是不表达。后来换用别人的pET-28a中，也转到BL、rosetta中，表达了一丁丁点点，恳求各位大侠，有什么建设性的建议？纠结死了，做了一个多月了，就是不表达！！！！ [ Last edited by 1949stone on 2012-12-14 at 13:06 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有123人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- western blot 出不来结果！！！
已经有17人回复
- 蛋白表达不出来
已经有23人回复
- 急求！！！胰蛋白酶水解鱼精蛋白的方法！！！
已经有11人回复
- 急求 多谢 关于大肠杆菌菌体总蛋白的提取
已经有5人回复
- 【资料】蛋白融合表达标签选择问题外文文献三篇
已经有21人回复
- 紧急求助:SDS-PAGE上样一定要调蛋白含量吗？
已经有9人回复
- 同时表达两种蛋白表达问题
已经有3人回复
- pet30a原核表达蛋白大小问题
已经有4人回复
- 大肠杆菌表达蛋白提取总不成功，求助高手指教！
已经有5人回复
- 蛋白表达不明确，但是连菌体蛋白都不见
已经有9人回复
- 有关蛋白表达的问题
已经有25人回复
- 膜蛋白表达问题
已经有15人回复
- 蛋白表达纠结啊
已经有4人回复
- 做蛋白体外表达时的引物设计问题！
已经有12人回复
- 【求助/交流】差异蛋白表达问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】组氨酸标记的蛋白表达活性问题
已经有17人回复
- 【求助/交流】关于绿色荧光蛋白表达问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】跨膜蛋白表达问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】关于大肠杆菌中蛋白表达的问题
已经有9人回复
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
2楼2012-12-13 23:07:40
简单HE认真
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1706.2
- 散金: 32
- 红花: 3
- 帖子: 74
- 在线: 44.8小时
- 虫号: 1905190
- 注册: 2012-07-22
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
3楼2012-12-13 23:34:59
转基因猴子
木虫 (正式写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 3791.5
- 散金: 29
- 红花: 4
- 帖子: 784
- 在线: 277.7小时
- 虫号: 450786
- 注册: 2007-11-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2012-12-14 10:31:45
静安jingan
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 86 (初中生)
- 贵宾: 0.932
- 金币: 9295.7
- 散金: 2894
- 红花: 43
- 沙发: 28
- 帖子: 4233
- 在线: 1412.1小时
- 虫号: 2005883
- 注册: 2012-09-16
- 性别: MM
- 专业: 免疫相关疾病其他科学问题
5楼2012-12-14 11:26:59
wangyoucao52
银虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 282
- 散金: 50
- 红花: 1
- 帖子: 114
- 在线: 19.4小时
- 虫号: 1477476
- 注册: 2011-11-05
- 专业: 临床兽医学
6楼2012-12-14 14:06:49
7楼2012-12-14 14:57:38
8楼2012-12-14 15:00:20
感谢参与，应助指数 +1
|
本帖内容被屏蔽 |
9楼2012-12-15 12:58:47
|
本帖内容被屏蔽 |
10楼2012-12-15 13:00:07
