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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白表达问题
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议对密码子进行优化，真核的基因片段中有些密码子在原核里是不存在或者很少的
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11楼2012-12-16 12:57:45
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yanbingkun79

新虫 (初入文坛)
谢谢各位的建议，我的目的基因不是原核的啊，就是大肠本身的，我只是把大肠本身的基因弄到pET-28a上，想让这个酶蛋白过量表达，所以应该不会被大肠杆菌降解的吧，重新转了一次pET，这次有少量少量很少量的表达，就是不知道问题出在哪里。
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12楼2012-12-17 09:04:13
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带刺毛毛虫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-13 23:07:40
5-30mM IPTG诱导是不是高了点？我是0.2-0.6mM诱导的，表达的很好，37度诱导3个小时，我的蛋白大小为65Kd左右，我的载体也是pET-28a

你的蛋白不是包涵体吗？
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加油
13楼2012-12-17 11:02:24
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
13楼: Originally posted by 带刺毛毛虫 at 2012-12-17 11:02:24
你的蛋白不是包涵体吗？...

我蛋白最后也是在包涵体里面，上清里面一点都没有，最后就没提了
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
14楼2012-12-17 11:10:10
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yanbingkun79

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 带刺毛毛虫 at 2012-12-17 11:02:24
你的蛋白不是包涵体吗？...

还真没有包涵体，只是单纯的表达的少。。。。
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15楼2012-12-17 22:04:20
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