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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议对密码子进行优化,真核的基因片段中有些密码子在原核里是不存在或者很少的
关注我关注的
11楼2012-12-16 12:57:45
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yanbingkun79

新虫 (初入文坛)

谢谢各位的建议,我的目的基因不是原核的啊,就是大肠本身的,我只是把大肠本身的基因弄到pET-28a上,想让这个酶蛋白过量表达,所以应该不会被大肠杆菌降解的吧,重新转了一次pET,这次有少量少量很少量的表达,就是不知道问题出在哪里。
12楼2012-12-17 09:04:13
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带刺毛毛虫

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-13 23:07:40
5-30mM IPTG诱导是不是高了点?我是0.2-0.6mM诱导的,表达的很好,37度诱导3个小时,我的蛋白大小为65Kd左右,我的载体也是pET-28a

你的蛋白不是包涵体吗?
加油
13楼2012-12-17 11:02:24
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
13楼: Originally posted by 带刺毛毛虫 at 2012-12-17 11:02:24
你的蛋白不是包涵体吗?...

我蛋白最后也是在包涵体里面,上清里面一点都没有,最后就没提了
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
14楼2012-12-17 11:10:10
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yanbingkun79

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 带刺毛毛虫 at 2012-12-17 11:02:24
你的蛋白不是包涵体吗?...

还真没有包涵体,只是单纯的表达的少。。。。
15楼2012-12-17 22:04:20
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