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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白表达不出来
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475502411

铜虫 (著名写手)

[交流] 蛋白表达不出来

大家好，毕业后做蛋白表达的工作，之前在学校没有做过这方面，现在做乙肝表面抗原的原核和真核都没有表达出来，不知道是怎么回事
1.初次做时选择好多原核载体都没有表达出来，以为是密码子偏爱性的问题，对片段进行了优化，但是现在选择28a和DSbA载体还是表达不出来，不知道什么问题，求大家支招？
2.做酵母GS115的表达，转化后直接用G418的YPD板筛选得到了阳性菌株，且已经PCR鉴定，但诱导1% 的甲醇，得到的条带是实际蛋白的三倍。不知道是不是？
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1楼 2012-10-14 15:44:17
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AZURESKY1999

至尊木虫 (知名作家)
★ ★ ★ ★
475502411(金币+1): 谢谢参与
475502411: 金币+3 2012-10-19 08:57:34
菌体经培养后诱导表达目的蛋白，宿主菌经处理有没有进行WB以验证目的蛋白有无表达？
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4楼2012-10-14 16:28:33
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liuguilin

禁言 (文学泰斗)
★
475502411(金币+1): 谢谢参与
表达不出来原因很多。
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7楼2012-10-14 17:05:34
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liuguilin

禁言 (文学泰斗)
也许是载体不合适。
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8楼2012-10-14 17:06:50
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liguoqing10

新虫 (初入文坛)
★
475502411(金币+1): 谢谢参与
建议更换载体或宿主试试
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15楼2012-10-14 20:22:22
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xlblank

新虫 (正式写手)
★
475502411(金币+1): 谢谢参与
xlblank回复
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19楼2012-10-15 09:10:11
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dshlove

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
475502411(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流，欢迎常来 2012-10-15 13:46:13
1，蛋白不能表达的原因很多。
有启动子问题，有核糖体结合位点问题，有密码子利用率的问题，可能蛋白水解了，也有可能是诱导条件的不对，或者蛋白有毒，编码DNA被细胞删掉了，或者宿主的问题，比较多，你对照着看看。
2，是不是你的目的蛋白，你需要WB鉴定下，不然不好说。
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20楼2012-10-15 10:14:13
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475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by AZURESKY1999 at 2012-10-14 16:28:33
菌体经培养后诱导表达目的蛋白，宿主菌经处理有没有进行WB以验证目的蛋白有无表达？

做了，但是看不出有目的蛋白，因为不知道怎么回事，我做的WB有好多条带，液不确定是不是目的条带
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21楼2012-10-19 08:57:16
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植物园园长

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
天根有无细胞体外蛋白表达的产品，专门解决难表达和难溶蛋白表达问题，现在解决了很多人的问题，建议打天根公司的技术支持电话咨询一下。
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22楼2012-10-19 09:03:35
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475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 植物园园长 at 2012-10-19 09:03:35
天根有无细胞体外蛋白表达的产品，专门解决难表达和难溶蛋白表达问题，现在解决了很多人的问题，建议打天根公司的技术支持电话咨询一下。

我问问，上周我又合成了一个新的引物，把蛋白变小了，就取了中间一半，主要去掉了疏水区，不知道会不会呢高表达出来。
请问你在考虑蛋白的时候都要考虑哪些方面啊？
比如疏水、RNA的结构.....
谢谢
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23楼2012-10-22 10:55:12
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吃小虫的鸡

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以用cell free expression system 试试，英杰公司的
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24楼2012-12-14 12:46:44
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xubaolei2楼
2012-10-14 15:52   回复  
475502411(金币+1): 谢谢参与
yu288773楼
2012-10-14 15:55   回复  
475502411(金币+1): 谢谢参与
shannon20105楼
2012-10-14 16:35   回复  
475502411(金币+1): 谢谢参与
我是小乖乖6楼
2012-10-14 16:57   回复  
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flyxu9楼
2012-10-14 17:10   回复  
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失落的豇豆10楼
2012-10-14 17:36   回复  
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blackdogzmz11楼
2012-10-14 19:43   回复  
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ky压力山大12楼
2012-10-14 19:52   回复  
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ts_chenchao13楼
2012-10-14 20:05   回复  
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mercivous14楼
2012-10-14 20:05   回复  
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yingying158816楼
2012-10-14 22:39   回复  
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yingying158817楼
2012-10-14 22:40   回复  
cmzcbPH18楼
2012-10-15 08:26   回复  
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