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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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475502411

铜虫 (著名写手)


[交流] 蛋白表达不出来

大家好,毕业后做蛋白表达的工作,之前在学校没有做过这方面,现在做乙肝表面抗原的原核和真核都没有表达出来,不知道是怎么回事
1.初次做时选择好多原核载体都没有表达出来,以为是密码子偏爱性的问题,对片段进行了优化,但是现在选择28a和DSbA载体还是表达不出来,不知道什么问题,求大家支招?
2.做酵母GS115的表达,转化后直接用G418的YPD板筛选得到了阳性菌株,且已经PCR鉴定,但诱导1% 的甲醇,得到的条带是实际蛋白的三倍。不知道是不是?
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AZURESKY1999

至尊木虫 (知名作家)


★ ★ ★ ★
475502411(金币+1): 谢谢参与
475502411: 金币+3 2012-10-19 08:57:34
菌体经培养后诱导表达目的蛋白,宿主菌经处理有没有进行WB以验证目的蛋白有无表达?
4楼2012-10-14 16:28:33
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liuguilin

禁言 (文学泰斗)



475502411(金币+1): 谢谢参与
表达不出来原因很多。
7楼2012-10-14 17:05:34
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liuguilin

禁言 (文学泰斗)


也许是载体不合适。
8楼2012-10-14 17:06:50
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liguoqing10

新虫 (初入文坛)



475502411(金币+1): 谢谢参与
建议更换载体或宿主试试
15楼2012-10-14 20:22:22
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xlblank

新虫 (正式写手)



475502411(金币+1): 谢谢参与
xlblank回复
19楼2012-10-15 09:10:11
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dshlove

木虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★
475502411(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流,欢迎常来 2012-10-15 13:46:13
1,蛋白不能表达的原因很多。
有启动子问题,有核糖体结合位点问题,有密码子利用率的问题,可能蛋白水解了,也有可能是诱导条件的不对,或者蛋白有毒,编码DNA被细胞删掉了,或者宿主的问题,比较多,你对照着看看。
2,是不是你的目的蛋白,你需要WB鉴定下,不然不好说。
20楼2012-10-15 10:14:13
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475502411

铜虫 (著名写手)


引用回帖:
4楼: Originally posted by AZURESKY1999 at 2012-10-14 16:28:33
菌体经培养后诱导表达目的蛋白,宿主菌经处理有没有进行WB以验证目的蛋白有无表达?

做了,但是看不出有目的蛋白,因为不知道怎么回事,我做的WB有好多条带,液不确定是不是目的条带
21楼2012-10-19 08:57:16
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植物园园长

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
天根有无细胞体外蛋白表达的产品,专门解决难表达和难溶蛋白表达问题,现在解决了很多人的问题,建议打天根公司的技术支持电话咨询一下。
22楼2012-10-19 09:03:35
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475502411

铜虫 (著名写手)


引用回帖:
22楼: Originally posted by 植物园园长 at 2012-10-19 09:03:35
天根有无细胞体外蛋白表达的产品,专门解决难表达和难溶蛋白表达问题,现在解决了很多人的问题,建议打天根公司的技术支持电话咨询一下。

我问问,上周我又合成了一个新的引物,把蛋白变小了,就取了中间一半,主要去掉了疏水区,不知道会不会呢高表达出来。
请问你在考虑蛋白的时候都要考虑哪些方面啊?
比如疏水、RNA的结构.....
谢谢
23楼2012-10-22 10:55:12
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吃小虫的鸡

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以用cell free expression system 试试,英杰公司的
24楼2012-12-14 12:46:44
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简单回复
xubaolei2楼
2012-10-14 15:52   回复  
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yu288773楼
2012-10-14 15:55   回复  
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2012-10-14 16:35   回复  
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2012-10-14 16:57   回复  
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flyxu9楼
2012-10-14 17:10   回复  
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2012-10-14 20:05   回复  
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mercivous14楼
2012-10-14 20:05   回复  
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2012-10-14 22:39   回复  
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2012-10-14 22:40   回复  
cmzcbPH18楼
2012-10-15 08:26   回复  
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