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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白表达不出来
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475502411

铜虫 (著名写手)

[交流] 蛋白表达不出来

大家好，毕业后做蛋白表达的工作，之前在学校没有做过这方面，现在做乙肝表面抗原的原核和真核都没有表达出来，不知道是怎么回事
1.初次做时选择好多原核载体都没有表达出来，以为是密码子偏爱性的问题，对片段进行了优化，但是现在选择28a和DSbA载体还是表达不出来，不知道什么问题，求大家支招？
2.做酵母GS115的表达，转化后直接用G418的YPD板筛选得到了阳性菌株，且已经PCR鉴定，但诱导1% 的甲醇，得到的条带是实际蛋白的三倍。不知道是不是？
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1楼 2012-10-14 15:44:17
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dshlove

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
475502411(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流，欢迎常来 2012-10-15 13:46:13
1，蛋白不能表达的原因很多。
有启动子问题，有核糖体结合位点问题，有密码子利用率的问题，可能蛋白水解了，也有可能是诱导条件的不对，或者蛋白有毒，编码DNA被细胞删掉了，或者宿主的问题，比较多，你对照着看看。
2，是不是你的目的蛋白，你需要WB鉴定下，不然不好说。
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20楼2012-10-15 10:14:13
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AZURESKY1999

至尊木虫 (知名作家)
★ ★ ★ ★
475502411(金币+1): 谢谢参与
475502411: 金币+3 2012-10-19 08:57:34
菌体经培养后诱导表达目的蛋白，宿主菌经处理有没有进行WB以验证目的蛋白有无表达？
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4楼2012-10-14 16:28:33
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liuguilin

禁言 (文学泰斗)
★
475502411(金币+1): 谢谢参与
表达不出来原因很多。
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7楼2012-10-14 17:05:34
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liuguilin

禁言 (文学泰斗)
也许是载体不合适。
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8楼2012-10-14 17:06:50
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