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蛋白表达问题
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本人做一个大肠杆菌本身酶蛋白的外源表达，具体如下： 将大肠这个目的片段在ecogene中查出，然后设计引物PCR，连到pMD-18T上，转录DH5α中，酶切验证测序全部正确；在连接到pET-28a上，转录BL21（DE3）中，酶切验证测序也全部正确。5-30mM IPTG诱导，20℃、30℃、37℃温度梯度也都设了，还换了宿主细胞Rosetta中，还是不表达。后来换用别人的pET-28a中，也转到BL、rosetta中，表达了一丁丁点点，恳求各位大侠，有什么建设性的建议？纠结死了，做了一个多月了，就是不表达！！！！ [ Last edited by 1949stone on 2012-12-14 at 13:06 ] |
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