24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2391  |  回复: 21
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

伤何处

木虫 (正式写手)

[求助] 克隆基因,挑克隆拿去测序,好多点突怎么办!?

两个基因都挑了11个送去测序,之前PCR扩增是22个循环扩的,然后连接载体转化。。测序结果显示,每条都有很多点突怎么办?用的是ExTaq酶

[ Last edited by 伤何处 on 2012-12-13 at 21:15 ]
回复此楼

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

对也罢,错也罢;正也罢,逆也罢;通途也好,崎岖无妨……但问,吾心坚否?若坚,纵使歧路,以铁心,贯穿而过,亦为大道!不坚,便是坦途,也难登临绝顶,观险峰
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

伤何处

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wangpeng227 at 2012-12-13 21:45:17
ExTaq不具有校对活性,比较容易出错的。
建议使用高保真酶,如pfu, Pyrobest,phusion等。采用高保真酶,扩增30个循环以内,一般还是可以保证不出错的。

我是从cDNA扩增的,直接用pfu可以么?师兄说pfu很难扩出来
对也罢,错也罢;正也罢,逆也罢;通途也好,崎岖无妨……但问,吾心坚否?若坚,纵使歧路,以铁心,贯穿而过,亦为大道!不坚,便是坦途,也难登临绝顶,观险峰
4楼2012-12-13 22:04:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主你用的是模板扩增序列然后连接送测序的,
首先,你要保证原始模板没有突变,否则你做PCR时是肯定会有突变的
其次,你需要用高保真的酶,比如pfu, Kod等,楼主的PCR循环控制的很好
祝楼主成功!
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-12-13 21:21:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
伤何处: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-12-13 22:04:41
ExTaq不具有校对活性,比较容易出错的。
建议使用高保真酶,如pfu, Pyrobest,phusion等。采用高保真酶,扩增30个循环以内,一般还是可以保证不出错的。
3楼2012-12-13 21:45:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 伤何处 at 2012-12-13 22:04:21
我是从cDNA扩增的,直接用pfu可以么?师兄说pfu很难扩出来...

是的,从cDNA里面扩增的,还是用ExTaq比较好,既然有突变,那就能这样了,接下来,你可以将不同克隆之间没有突变的部分拼接起来,酶切的方法,overlap的方法,还有你要查清楚,你所讲的突变,发生率是否高,是不是SNP造成的,如果确定是突变,就想办法把突变修正回来
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2012-12-13 23:11:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 327求调剂 +3 小卡不卡. 2026-03-29 3/150 2026-03-29 22:29 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +4 QiMing7 2026-03-25 5/250 2026-03-29 21:10 by 唐沐儿
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-29 5/250 2026-03-29 16:46 by 学员8dgXkO
[考研] 22408 359分调剂 +4 Qshers 2026-03-27 6/300 2026-03-29 14:16 by Qshers
[考研] 070300化学354求调剂 +6 101次希望 2026-03-28 6/300 2026-03-29 12:57 by 无际的草原
[考研] 求收留 +5 1943443204 2026-03-28 5/250 2026-03-29 12:11 by 无际的草原
[考研] 348求调剂 +5 小懒虫不懒了 2026-03-28 5/250 2026-03-29 10:34 by 唐沐儿
[考研] 289求调剂 +13 新时代材料 2026-03-27 13/650 2026-03-29 01:16 by 544594351
[考研] 11408软件工程求调剂 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 21:50 by zhq0425
[考研] 学硕274求调剂 +9 Li李鱼 2026-03-26 9/450 2026-03-28 21:42 by bymhappy
[考研] 085701求调剂初试286分 +4 secret0328 2026-03-28 4/200 2026-03-28 21:09 by 15366876211
[考研] 本科新能源科学与工程,一志愿华理能动285求调剂 +3 AZMK 2026-03-27 5/250 2026-03-28 16:19 by xxxsssccc
[考研] 材料277求调剂 +7 min3 2026-03-24 7/350 2026-03-28 11:39 by xuxiang
[考研] 085701环境工程求调剂 +9 多久上课 2026-03-27 9/450 2026-03-28 03:58 by fmesaito
[考研] 330一志愿中国海洋大学 化学工程 085602 有读博意愿 求调剂 +3 wywy.. 2026-03-27 4/200 2026-03-28 03:32 by fmesaito
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 考研调剂 +4 Sanmu-124 2026-03-26 4/200 2026-03-27 17:49 by kiokin
[考研] 材料求调剂 +5 .m.. 2026-03-25 5/250 2026-03-27 11:08 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿河工大 081700 276求调剂 +4 地球绕着太阳转 2026-03-23 4/200 2026-03-26 14:27 by zzll406
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
信息提示
请填处理意见