应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot 条带
161/2返回列表12下一页
查看: 2527  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

fyh12788

银虫 (初入文坛)

[求助] western blot 条带

western blot条带连成一线，没有带型。蛋白上样量不大，配胶是实验室公用的，pH没弄错，上完样马上就跑了。刚开始跑电泳的时候能分清泳道，后来就连一块了，没有带型。
一两周都是这样，谁能告诉我是为什么，谢谢啊。

1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-12-08 14:36:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

henryxue

木虫 (小有名气)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验，以后如果是应助的话，请选择应助回帖，不然楼主没法给奖励 2012-12-09 07:15:01
你说的是最左边粗粗的一整条吗？这个是不是你胶溴酚蓝的地方？是不是你膜的最边上？
从你中间隐约的条带来看，似乎分离胶与浓缩胶界面也不像有问题，有时候会因为界面凝得不好条带会漏到相邻的地方。
赞一下 回复此楼
2楼2012-12-08 20:19:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
从你marker右边的几个泳道看，问题似乎不是很大。可以把胶染一下看。有时候目的蛋白浓度很高，即使总蛋白上样量不大也会出现这种情况。
赞一下 回复此楼
3楼2012-12-09 02:36:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fyh12788

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by henryxue at 2012-12-08 20:19:54
你说的是最左边粗粗的一整条吗？这个是不是你胶溴酚蓝的地方？是不是你膜的最边上？
从你中间隐约的条带来看，似乎分离胶与浓缩胶界面也不像有问题，有时候会因为界面凝得不好条带会漏到相邻的地方。

恩，最左边粗条带，10多KD，在靠边的地方。它上侧的带型就不正常。
不知道究竟是什么问题
赞一下 回复此楼
4楼2012-12-09 10:23:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fyh12788

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-09 02:36:19
从你marker右边的几个泳道看，问题似乎不是很大。可以把胶染一下看。有时候目的蛋白浓度很高，即使总蛋白上样量不大也会出现这种情况。

染了下胶，胶上条带也是，上部分胶能分清泳道。下面的条带也连在一起。蛋白浓度高的话，曝光量不应该也大吗
赞一下 回复此楼
5楼2012-12-09 10:25:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-12-10 08:16:02
引用回帖:
5楼: Originally posted by fyh12788 at 2012-12-09 10:25:56
染了下胶，胶上条带也是，上部分胶能分清泳道。下面的条带也连在一起。蛋白浓度高的话，曝光量不应该也大吗...

Western信号的强弱要看抗体的效价，与单个蛋白的绝对量没有直接关系。如果小分子量蛋白样品连在一起而胶的上部分分开，可能是电泳停下来后扩散了，因为小分子量蛋白扩散比较快。停电泳前把转膜的东西都准备好，电泳结束后立即转膜。
赞一下 回复此楼
6楼2012-12-09 12:40:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

henryxue

木虫 (小有名气)
跑了多大浓度的胶？是不是下面没有分开？
赞一下 回复此楼
7楼2012-12-09 20:29:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fyh12788

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by henryxue at 2012-12-09 20:29:54
跑了多大浓度的胶？是不是下面没有分开？

10%的胶，没有分开
赞一下 回复此楼
8楼2012-12-10 09:00:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fyh12788

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-09 12:40:47
Western信号的强弱要看抗体的效价，与单个蛋白的绝对量没有直接关系。如果小分子量蛋白样品连在一起而胶的上部分分开，可能是电泳停下来后扩散了，因为小分子量蛋白扩散比较快。停电泳前把转膜的东西都准备好，电泳 ...

可是染胶以后，中间部分的条带就已经连在一块了
赞一下 回复此楼
9楼2012-12-10 09:00:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

juanzi7229

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是胶没有做好，漏了啊？还有就是可能抗体效价太高，曝光的时间短点呢？然后快速显影，这种现象我也遇到过，大概就是因为上述的情况。
赞一下 回复此楼
10楼2012-12-10 10:16:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fyh12788 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +6 雨打竹帘 2026-08-30 10/500 2026-08-31 09:29 by huixian257
[文学芳草园] 梦想 +4 myrtle 2026-08-26 4/200 2026-08-31 08:43 by 逸域隐帆
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 08:28 by xiangy672
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭