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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot 条带
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fyh12788

银虫 (初入文坛)

[求助] western blot 条带

western blot条带连成一线，没有带型。蛋白上样量不大，配胶是实验室公用的，pH没弄错，上完样马上就跑了。刚开始跑电泳的时候能分清泳道，后来就连一块了，没有带型。
一两周都是这样，谁能告诉我是为什么，谢谢啊。

1.jpg
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1楼 2012-12-08 14:36:25
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fyh12788

银虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by henryxue at 2012-12-08 20:19:54
你说的是最左边粗粗的一整条吗？这个是不是你胶溴酚蓝的地方？是不是你膜的最边上？
从你中间隐约的条带来看，似乎分离胶与浓缩胶界面也不像有问题，有时候会因为界面凝得不好条带会漏到相邻的地方。

恩，最左边粗条带，10多KD，在靠边的地方。它上侧的带型就不正常。
不知道究竟是什么问题
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4楼2012-12-09 10:23:02
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fyh12788

银虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-09 02:36:19
从你marker右边的几个泳道看，问题似乎不是很大。可以把胶染一下看。有时候目的蛋白浓度很高，即使总蛋白上样量不大也会出现这种情况。

染了下胶，胶上条带也是，上部分胶能分清泳道。下面的条带也连在一起。蛋白浓度高的话，曝光量不应该也大吗
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5楼2012-12-09 10:25:56
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fyh12788

银虫 (初入文坛)
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7楼: Originally posted by henryxue at 2012-12-09 20:29:54
跑了多大浓度的胶？是不是下面没有分开？

10%的胶，没有分开
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8楼2012-12-10 09:00:02
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fyh12788

银虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-09 12:40:47
Western信号的强弱要看抗体的效价，与单个蛋白的绝对量没有直接关系。如果小分子量蛋白样品连在一起而胶的上部分分开，可能是电泳停下来后扩散了，因为小分子量蛋白扩散比较快。停电泳前把转膜的东西都准备好，电泳 ...

可是染胶以后，中间部分的条带就已经连在一块了
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9楼2012-12-10 09:00:46
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fyh12788

银虫 (初入文坛)
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10楼: Originally posted by juanzi7229 at 2012-12-10 10:16:40
是不是胶没有做好，漏了啊？还有就是可能抗体效价太高，曝光的时间短点呢？然后快速显影，这种现象我也遇到过，大概就是因为上述的情况。

要是漏了，为什么最初能分清泳道啊
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12楼2012-12-10 11:24:25
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fyh12788

银虫 (初入文坛)
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13楼: Originally posted by juanzi7229 at 2012-12-10 15:13:48
我说的漏了是相邻的孔之间会漏，跑胶的时候能看出来，在跑浓缩胶的时候等看着点，虽然到后面的分离胶看着还是分开的，但实际上相邻的孔之间已经串了...

如果是胶漏了，是拔梳子的时候孔漏了吗。那样点样的时候就能看出来啊
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14楼2012-12-10 15:54:50
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fyh12788

银虫 (初入文坛)
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11楼: Originally posted by henryxue at 2012-12-10 11:05:56
我觉得应该就是这个问题了，你跑15%的胶，那个条带就会分成一个个泳道了。主要是下面小蛋白都挤在一起了，然后可能因为非特性信号的堆积导致粗粗的一大条...

如果只能跑10%的胶，按您的意思，就无法避免这样的状况吗
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15楼2012-12-10 15:56:24
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