24小时热门版块排行榜    

查看: 792  |  回复: 12

11720497

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因克隆问题

老师安排做一种植物A中的a基因的克隆,但是这个a基因在A中没有报道过任何信息,只能通过其他物种B、C中a基因序列保守序列设计兼并来P,但是老是P不出来。最近我用植物B中a基因的ORF设计引物来扩A的模板,结果P出来了条带,请问各位大侠,我接下来该怎么做?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

11720497

新虫 (初入文坛)

本人新申请的号,求各位大侠帮帮忙啊
2楼2012-11-27 10:47:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西农种子

木虫 (著名写手)

青虫还是酱爆的好

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
连接到载体上测序。测序回来以后与类似物种进行序列比对。
快来粉奶牛的围脖~~http://weibo.com/i/zhaoyuan913
3楼2012-11-27 10:50:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

11720497

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 11720497 at 2012-11-27 10:47:06
本人新申请的号,求各位大侠帮帮忙啊

我那样做了,可是NCBI比对发现,和B中a基因相似度99%,怎么会这样啊
4楼2012-11-27 10:53:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

11720497

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 西农种子 at 2012-11-27 10:50:46
连接到载体上测序。测序回来以后与类似物种进行序列比对。

我那样做了,可是NCBI比对发现,和B中a基因相似度99%,怎么会这样啊
5楼2012-11-27 10:54:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西农种子

木虫 (著名写手)

青虫还是酱爆的好

引用回帖:
5楼: Originally posted by 11720497 at 2012-11-27 10:54:31
我那样做了,可是NCBI比对发现,和B中a基因相似度99%,怎么会这样啊...

首先你要求证:相近报道的物种之间,是不是基因保守性很强。人体,动物,植物之间有些基因的保守性的确可以达到很高,比如泛素。
其次,如果是保守性不强。你又怀疑结果,推荐你用试剂盒做RACE。然后将得到的序列测序。
快来粉奶牛的围脖~~http://weibo.com/i/zhaoyuan913
6楼2012-11-27 11:00:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

11720497

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 西农种子 at 2012-11-27 11:00:55
首先你要求证:相近报道的物种之间,是不是基因保守性很强。人体,动物,植物之间有些基因的保守性的确可以达到很高,比如泛素。
其次,如果是保守性不强。你又怀疑结果,推荐你用试剂盒做RACE。然后将得到的序列 ...

老师,我现在疑惑的是我兼并P了一个月都没出来条带,这次用这个特异P为什么P出来了而且比对还这么高?
7楼2012-11-27 11:11:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西农种子

木虫 (著名写手)

青虫还是酱爆的好

引用回帖:
7楼: Originally posted by 11720497 at 2012-11-27 11:11:10
老师,我现在疑惑的是我兼并P了一个月都没出来条带,这次用这个特异P为什么P出来了而且比对还这么高?...

我不是老师啊~~~我也是学生的亲~~

兼并引物不一定能扩增出来的~我们实验室有个孩子前段时间也是用的兼并并没有扩出来,后来做的RACE才测出序列的。结果比对差异也不是很大。
你说没扩出来还有可能就是引物设计的问题呐~~先看看是不是保守基因再决定是不是要做RACE吧~
快来粉奶牛的围脖~~http://weibo.com/i/zhaoyuan913
8楼2012-11-27 12:30:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

11720497

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 西农种子 at 2012-11-27 12:30:15
我不是老师啊~~~我也是学生的亲~~

兼并引物不一定能扩增出来的~我们实验室有个孩子前段时间也是用的兼并并没有扩出来,后来做的RACE才测出序列的。结果比对差异也不是很大。
你说没扩出来还有可能就是引物设计 ...

我做的a基因在A中一点报道没,EST也没有,我现在是兼并扩不出来,所以才用的B植物中的a基因的ORF引物扩A模板,结果P出来比对100%。所以才感觉不靠谱。
9楼2012-11-27 13:51:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西农种子

木虫 (著名写手)

青虫还是酱爆的好

引用回帖:
9楼: Originally posted by 11720497 at 2012-11-27 13:51:48
我做的a基因在A中一点报道没,EST也没有,我现在是兼并扩不出来,所以才用的B植物中的a基因的ORF引物扩A模板,结果P出来比对100%。所以才感觉不靠谱。...

这样的啊~要不然的话就还是做RACE试试吧。我们实验室的那个做了RACE就弄好了。
植物A和B是不同科嘛?要是同科的话相似率还是蛮大的
快来粉奶牛的围脖~~http://weibo.com/i/zhaoyuan913
10楼2012-11-27 14:12:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 11720497 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[基金申请] 各位基础老师们,看完中央《从严治党》的决定后,对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
请填处理意见