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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Q-Sepharose Fast Flow 纯化蛋白遇到的棘手问题
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william9798

铜虫 (小有名气)

[交流] Q-Sepharose Fast Flow 纯化蛋白遇到的棘手问题

本人需要纯化一个膜蛋白。首先提膜蛋白，然后过Q-Sepharose Fast Flow离子交换柱。目的蛋白PI预测是7.2，我用的缓冲液是20mMTris-cl(pH7.8-8.0, 2.5mM二硫苏糖醇，0.05% Triton x-100). 为什么每次过柱的穿透液紫外吸收峰非常高，而氯化钠梯度洗脱下来的蛋白非常少。感觉蛋白挂不上柱子。请问大家这个是为什么？柱子是新的，电导大概在2-3ms/cm。请大家提供宝贵意见
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1楼2012-10-18 17:59:54
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alarace

至尊木虫 (知名作家)
★
william9798(金币+3): 谢谢参与
缓冲溶液可能太接近pI了，换点别的缓冲液
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2楼2012-10-18 21:58:13
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blackdogzmz

木虫 (职业作家)
★
william9798(金币+3): 谢谢参与
帮顶
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3楼2012-10-18 22:41:47
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userhung

禁虫 (文学泰斗)
★
william9798(金币+3): 谢谢参与
考虑一下缓冲液哦~~~~~~~~~~~~~
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5楼2012-10-18 23:01:44
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syhorchid

木虫之王 (文学泰斗)
★
william9798(金币+3): 谢谢参与
加点稳定剂吧
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8楼2012-10-19 00:51:42
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chui2004

铁杆木虫 (正式写手)
★
william9798(金币+3): 谢谢参与
同意2楼的！

[ Last edited by chui2004 on 2012-10-21 at 16:49 ]
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9楼2012-10-21 16:45:28
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豆豆菜虫

金虫 (正式写手)
★ ★
william9798(金币+3): 谢谢参与
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-29 15:51:33
我想问一下你的Q sepharose fast flow 填料溶胀后是什么颜色~~~我这边有一个被我以前的师兄用过的填料  然后是乳白色的有点偏黄~~~然后还有就是杂质特多，还有就是问一下你的那个QFF颗粒是不是很小？？？你能给我说一下你的QFF的一些性状么 谢谢啦~~~
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10楼2012-10-29 10:48:51
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豆豆菜虫

金虫 (正式写手)
还有 QFF本来拿到手的时候是固体的还是液体的啊
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11楼2012-10-29 10:58:10
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)
★
william9798(金币+3): 谢谢参与
你应该检测你的蛋白是在流出还是在解离部份
如果没有吸附或吸附的很少，你考虑把你的缓冲液PH值提高1个单位
如果还是不行，你考虑换其他的纯化介质如阳离子的或疏水填料尝试一下。
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12楼2012-10-29 16:24:33
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残暴的肉球4楼
2012-10-18 22:55   回复  
william9798(金币+3): 谢谢参与
cl666楼
2012-10-18 23:04   回复  
william9798(金币+3): 谢谢参与
我是小乖乖7楼
2012-10-18 23:07   回复  
william9798(金币+3): 谢谢参与
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