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william9798

铜虫 (小有名气)

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[交流] Q-Sepharose Fast Flow 纯化蛋白遇到的棘手问题

本人需要纯化一个膜蛋白。首先提膜蛋白，然后过Q-Sepharose Fast Flow离子交换柱。目的蛋白PI预测是7.2，我用的缓冲液是20mMTris-cl(pH7.8-8.0, 2.5mM二硫苏糖醇，0.05% Triton x-100). 为什么每次过柱的穿透液紫外吸收峰非常高，而氯化钠梯度洗脱下来的蛋白非常少。感觉蛋白挂不上柱子。请问大家这个是为什么？柱子是新的，电导大概在2-3ms/cm。请大家提供宝贵意见

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1楼 2012-10-18 17:59:54

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alarace

至尊木虫 (知名作家)

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★
william9798(金币+3): 谢谢参与

缓冲溶液可能太接近pI了，换点别的缓冲液

2楼2012-10-18 21:58:13

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