| 查看: 1525 | 回复: 8 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
土壤真菌PCR的问题
|
||
|
最近在P土壤真菌DNA，没条带，用的引物是ITS1F/ITS2 我是用周继中的方法提的DNA，测浓度（2g土差不多能提200~300 ng/ul）后稀释到 1 ng/ul 作为模板，同一份模板我在做细菌PCR时结果还行基本上都P的出来，但真菌是才开始摸索，望大家多提提建议 25ul 体系 模板 2 引物 1 水 9.5 ExTaq 12.5 PCR程序 94 ℃ for 4 min, 30 cycles of 30 s at 94 ℃, 50 ℃ for 1 min and 72 ℃ for 90 s, followed by 10 min at 72 ℃. |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有128人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- T-RFLP技术中，真菌的PCR问题
已经有11人回复
- ITS1和ITS4做样品体系中真菌菌株鉴定，为啥PCR产物竟然是2个条带？
已经有11人回复
- 真菌转化技术--PCR获取线性化片段和限制性内切酶获取线性化片段的区别?
已经有9人回复
- 求助关于土壤细菌分离鉴定的知识，希望朋友帮忙解答
已经有8人回复
- 如何测定样品中活体微生物数量？
已经有17人回复
- 土壤真菌PCR-DGGE中真菌ITS区引物的选择
已经有10人回复
- 关于PCR-DGGE技术，此技术能分析土壤中的真菌吗？用什么引物好？需要注意什么？
已经有19人回复
- 培养皿杂菌去除
已经有19人回复
- 相对定量PCR求助
已经有16人回复
- 求助 土壤基因组 PCR 扩增问题
已经有30人回复
- 土壤真菌PCR，引物选择问题
已经有8人回复
- 真菌ITS序列PCR扩增 求助
已经有9人回复
- 土壤微生物总DNA提取试剂盒选购
已经有29人回复
- 崩溃了，土壤DNA提取
已经有20人回复
- 【求助/交流】在真菌基因组中PCR基因，难吗？
已经有18人回复
- 【求助/交流】有没有做土壤微生物群落多样性的 可以进来交流一下
已经有15人回复
4楼2012-10-15 12:46:37
2楼2012-10-14 17:27:10
3楼2012-10-15 08:46:43
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-10-17 14:45:57
fddyn: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢啊，明天尝试提高模板浓度试试 2012-10-17 20:18:34
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-10-17 14:45:57
fddyn: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢啊，明天尝试提高模板浓度试试 2012-10-17 20:18:34
|
因为这个酶我没用过，所以不好评定，如果你们实验室买东西比较自由，可以先买一只Promega的MIX试试，因为很多外文文献P土壤DNA都是用的Promega的GoTaq MIX，TAKARA的估计用于一般植物什么的基因的比较多，如果你不能换酶，把模版浓度提高，我们一般都是5——10ng/ul，然后循环增加到35——40循环，然后再试试 |
5楼2012-10-17 11:16:00
5