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酶切问题求助
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最近将PET-32a转化BL21，转进去后挑了5个单菌落，然后小提质粒酶切鉴定。但是酶切的结果是切不出任何的条带，并且转化之前的PET-32a质粒酶切切出了大小正确的条带。这说明我的体系是没有问题的，那为什么挑取的这5个菌落，小提质粒酶切却切不出来东西呢？大家帮忙分析下，谢谢 P.S 我用的是天根的质粒小提试剂盒 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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【答案】应助回帖
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额，看了上面的回答有点无语，楼主注意一下一下几点： 1 首先检查感受态质量，建议做一个对照试验，找个以前能转化出来的质粒作对照。 2 质粒转化只需要加1微升足以，至于步骤严格按照传统方法进行，另外需要说明的是，PET系列载体是原核表达载体，拷贝数比一般质粒要低很多，转化前最好测一下质粒浓度，保证有50ng转化就行了。 3 还是拷贝数的问题，由于PET载体的特殊性，提取质粒收菌要非常多，一般小提收菌要在6毫升以上，而且菌液还要浓一些，就这样，提取的质粒浓度都不是非常大，所以也有可能是收菌太少导致质粒浓度过低看不出条带。 4 转化过程本身一般不会有问题，容易有问题的就是感受态和抗生素，还是建议做对照来排除这两个因素。 |
11楼2012-09-05 11:24:13
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